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老是得不到我要的重组质粒，都6，7次了，真郁闷
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| 各位好，本人最近在做木瓜蛋白酶的克隆实验，目的基因1KB左右，用的是实验室保存的pHsh热激表达载体，PCR后用Stu1 和Hind111双酶切片段和载体（5小时），割胶回收后连接过夜（片段和载体的量大于10：1，我是把片段加的越多越好），1uL电转DH10B后，涂在具有卡那抗性的平板，放在30度培养箱内培养过夜，第二天我提取质粒，有6，7次都是长出东西来了（要么是杂菌，要么是质粒），但我提取后跑胶验证发现什么都没有，但是同样方法去做pHsh纯质粒转化可以长满板，而且提取后跑胶可以得到质粒结果，我真的很奇怪，希望高手指点！！！ |
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