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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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1437521148

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 蛋白纯化 已有2人参与

请问 有没有人知道  蛋白标准品如何去摸索纯化条件呢?如果用标准品去过柱子 接收到的液体用什么方法确定哪个点的洗脱效果是最好的呢

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ECUST_CAPF

兑换贵宾

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纠正一个问题,蛋白标准品就是些分子量大小已知的蛋白混合物,简单说就是用来标定对应的柱子的,换句话说就是标定分子量多少的蛋白应该在什么位置出峰,因为柱子使用久了,柱效会发生一定的变化,如蛋白A用新柱子是在20ml出峰,但是时间久了之后,可能就会在30ml出峰,这时候你就无法从出峰位置直观判定该蛋白是否正确了,需要跑胶看一下。

纯化条件的话建议你去GE官网上下载gel filtration的handbook,里面有推荐的buffer,一般就是50mM磷酸盐缓冲液,加上低盐 150mM 以下的NaCl,pH7.2 , 但是具体的盐浓度和pH要根据目的蛋白进行调整
Behind the glory is a loneliness
3楼2020-03-13 14:08:37
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众里124

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主你做了吗,我用镍柱纯化,有很多杂蛋白

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2楼2020-03-12 13:53:33
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ECUST_CAPF

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 众里124 at 2020-03-12 13:53:33
楼主你做了吗,我用镍柱纯化,有很多杂蛋白

看到你的贴了,还想在提示一下,你的Ni beas状态如何,新旧如何?一般是用的越多越发白,效果就越差。还有使用前用NaOH wash重生过没有?buffer平衡是否充分,这些都是很重要的因素
Behind the glory is a loneliness
4楼2020-03-13 14:11:26
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