24小时热门版块排行榜    

查看: 841  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

1437521148

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化 已有2人参与

请问 有没有人知道  蛋白标准品如何去摸索纯化条件呢?如果用标准品去过柱子 接收到的液体用什么方法确定哪个点的洗脱效果是最好的呢

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纠正一个问题,蛋白标准品就是些分子量大小已知的蛋白混合物,简单说就是用来标定对应的柱子的,换句话说就是标定分子量多少的蛋白应该在什么位置出峰,因为柱子使用久了,柱效会发生一定的变化,如蛋白A用新柱子是在20ml出峰,但是时间久了之后,可能就会在30ml出峰,这时候你就无法从出峰位置直观判定该蛋白是否正确了,需要跑胶看一下。

纯化条件的话建议你去GE官网上下载gel filtration的handbook,里面有推荐的buffer,一般就是50mM磷酸盐缓冲液,加上低盐 150mM 以下的NaCl,pH7.2 , 但是具体的盐浓度和pH要根据目的蛋白进行调整
Behind the glory is a loneliness
3楼2020-03-13 14:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

众里124

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主你做了吗,我用镍柱纯化,有很多杂蛋白

发自小木虫Android客户端
2楼2020-03-12 13:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 众里124 at 2020-03-12 13:53:33
楼主你做了吗,我用镍柱纯化,有很多杂蛋白

看到你的贴了,还想在提示一下,你的Ni beas状态如何,新旧如何?一般是用的越多越发白,效果就越差。还有使用前用NaOH wash重生过没有?buffer平衡是否充分,这些都是很重要的因素
Behind the glory is a loneliness
4楼2020-03-13 14:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见