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1437521148

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化 已有2人参与

请问 有没有人知道  蛋白标准品如何去摸索纯化条件呢？如果用标准品去过柱子 接收到的液体用什么方法确定哪个点的洗脱效果是最好的呢

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1楼 2020-03-11 22:54:53
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众里124

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你做了吗，我用镍柱纯化，有很多杂蛋白

发自小木虫Android客户端
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2楼2020-03-12 13:53:33
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纠正一个问题，蛋白标准品就是些分子量大小已知的蛋白混合物，简单说就是用来标定对应的柱子的，换句话说就是标定分子量多少的蛋白应该在什么位置出峰，因为柱子使用久了，柱效会发生一定的变化，如蛋白A用新柱子是在20ml出峰，但是时间久了之后，可能就会在30ml出峰，这时候你就无法从出峰位置直观判定该蛋白是否正确了，需要跑胶看一下。

纯化条件的话建议你去GE官网上下载gel filtration的handbook，里面有推荐的buffer，一般就是50mM磷酸盐缓冲液，加上低盐 150mM 以下的NaCl，pH7.2 ， 但是具体的盐浓度和pH要根据目的蛋白进行调整
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Behind the glory is a loneliness
3楼2020-03-13 14:08:37
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 众里124 at 2020-03-12 13:53:33
楼主你做了吗，我用镍柱纯化，有很多杂蛋白

看到你的贴了，还想在提示一下，你的Ni beas状态如何，新旧如何？一般是用的越多越发白，效果就越差。还有使用前用NaOH wash重生过没有？buffer平衡是否充分，这些都是很重要的因素
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Behind the glory is a loneliness
4楼2020-03-13 14:11:26
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