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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用磷酸化抗体检测目的蛋白磷酸化的程度实验步骤?
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joo

金虫 (正式写手)

[交流] 用磷酸化抗体检测目的蛋白磷酸化的程度实验步骤?

用磷酸化抗体检测目的蛋白磷酸化的程度实验步骤?

先用磷酸化抗体,striping,再用非磷酸化抗体？

还是把抗体颠倒过来使用？

已经在其他板块发帖求助，欢迎参与讨论，先谢谢了！

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1408545

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-1 at 15:56 ]
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1楼 2009-07-01 09:28:17
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
自然是先磷酸化抗体，曝了之后洗，然后再孵总抗体
应“从少到多”
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2楼2009-07-01 09:40:32
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joo

金虫 (正式写手)
谢谢 三磷酸腺苷 参与讨论。

可是也有人说 要先测总的，再测磷酸化的，这个我就不太懂了,他们之间的检测结果会有差别吗？
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3楼2009-07-01 10:21:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
350784478(金币+1,VIP+0):感谢参与 7-1 15:55
本来wb这种半定量的就已经很那个了
因为洗膜不一定能够把一抗二抗全部给洗掉，因此先孵总的，再洗，怎么样都会有残留，无论从抗原抗体结合的角度上看，还是从最后发光上看，总会有残留
这样就会影响磷酸化抗体的结合
如果先孵磷酸化的，结合得少，洗的话也能相对洗得更加干净
然后再孵总的，反正是总的，就算原来有残留的磷酸化一抗结合，那么不惧了
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4楼2009-07-01 10:48:01
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joo

金虫 (正式写手)
谢谢 三磷酸腺苷 的分析，解释。

在我们的实验中也是先用磷酸化的抗体，洗膜，再测总的。

可是有个审稿人的意见却说是应先做总的，再做磷酸化的。

看来这个问题可以和他理论一下了。

弱弱地问一句有人遇到和我们一样的审稿意见吗？
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-7-1 10:48:
本来wb这种半定量的就已经很那个了
因为洗膜不一定能够把一抗二抗全部给洗掉，因此先孵总的，再洗，怎么样都会有残留，无论从抗原抗体结合的角度上看，还是从最后发光上看，总会有残留
这样就会影响磷酸化抗体的 ...

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5楼2009-07-01 11:06:05
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