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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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[交流] real-time PCR的问题疑惑

请问real-time PCR用于探针法的引物可用于染料法的吗？因为参考文献很多都是探针法的，染料法比较少，所以不知道这两种方法所用的引物要求有什么不同？

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1楼 2020-03-03 09:39:48

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skull123

木虫 (正式写手)

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★
宇宙小妖怪(金币+1): 谢谢参与

可以，

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2楼2020-03-03 13:38:21

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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2020-03-11 08:08:18

有时候可以，但是往往不是最合适的。

Taqman一般以100bp以内为宜，

sybr片段则需要长一些，150~250

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3楼2020-03-03 14:18:32

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2020-03-11 08:08:31

染料法与探针法的引物可以通用，但是前体是你对PCR体系进行优化，使在保证灵敏度比改变的情况下引物浓度尽量的少。因为染料法对引物二聚体也有荧光信号，以上操作是你要保证引物二聚体尽量少。另外染料法需要做溶解曲线，如果溶解曲线主峰前面的线比较平滑没什么杂峰，说明引物没问题。在曲线这块BIOG和ROCHE还是很典型的。

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5楼2020-03-04 08:58:50

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