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jqq1985

银虫 (正式写手)

[交流] 求助分开130kd和138kd蛋白的SDS蛋白胶浓度.

如题,我有一个蛋白预计大小138kd,但是表达量不高,跑10%sds时没有目的条带,怀疑和大肠杆菌自身130左右的蛋白跑在一起,现在想重新跑胶.要将130左右的蛋白分开,分离胶浓度应该是多少?
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by aaaaaa1380 at 2009-6-25 10:27:
你可以试试11%或者10.5%SDS PAGE,12%的胶本实验室正在用,对于20-45KDa的蛋白质有较好的分辨率,根据你给的10%SDS胶分不开的结果,建议你用上述的浓度试试。
对于你表达的蛋白质浓度很低,建议你用银染,或者免 ...

靠改变胶浓度的方法来分这么靠近的蛋白很困难啊。

LZ要是用E.coli表达的蛋白,还是想想怎么提高表达量吧。这样低的表达量对于以后的提纯很困难滴。。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-06-25 11:15:53
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

这个比较困难了,o(∩_∩)o...,可以纯化下再跑.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-25 09:39:25
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


jqq1985(金币+1,VIP+0):谢谢 6-25 11:06
明确告诉LZ:分不开。

哈哈哈哈哈哈哈。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-06-25 09:44:10
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)


jqq1985(金币+1,VIP+0):谢谢 6-25 11:07
你可以试试11%或者10.5%SDS PAGE,12%的胶本实验室正在用,对于20-45KDa的蛋白质有较好的分辨率,根据你给的10%SDS胶分不开的结果,建议你用上述的浓度试试。
对于你表达的蛋白质浓度很低,建议你用银染,或者免疫亲和的方法富集一下你的样品,强烈推荐你用免疫共沉淀方法提取你想要的目的蛋白。

祝实验顺利
4楼2009-06-25 10:27:13
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