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jqq1985

银虫 (正式写手)

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[交流] 求助分开130kd和138kd蛋白的SDS蛋白胶浓度.

如题,我有一个蛋白预计大小138kd,但是表达量不高,跑10%sds时没有目的条带,怀疑和大肠杆菌自身130左右的蛋白跑在一起,现在想重新跑胶.要将130左右的蛋白分开,分离胶浓度应该是多少?

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1楼 2009-06-25 09:36:55

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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这个比较困难了,o(∩_∩)o...,可以纯化下再跑.

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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

2楼2009-06-25 09:39:25

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HarveyWang

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★
jqq1985(金币+1,VIP+0):谢谢 6-25 11:06

明确告诉LZ：分不开。

哈哈哈哈哈哈哈。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

3楼2009-06-25 09:44:10

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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)

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jqq1985(金币+1,VIP+0):谢谢 6-25 11:07

你可以试试11%或者10.5%SDS PAGE，12%的胶本实验室正在用，对于20-45KDa的蛋白质有较好的分辨率，根据你给的10%SDS胶分不开的结果，建议你用上述的浓度试试。
对于你表达的蛋白质浓度很低，建议你用银染，或者免疫亲和的方法富集一下你的样品，强烈推荐你用免疫共沉淀方法提取你想要的目的蛋白。

祝实验顺利

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4楼2009-06-25 10:27:13

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zhaocy8903

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表达量低到这种程度往下做就很困难了

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5楼2009-06-25 10:30:51

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lsbrc

银虫 (小有名气)

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jqq1985(金币+1,VIP+0):谢谢 6-25 11:06

用westernblot

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6楼2009-06-25 10:57:10

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HarveyWang

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by aaaaaa1380 at 2009-6-25 10:27:
你可以试试11%或者10.5%SDS PAGE，12%的胶本实验室正在用，对于20-45KDa的蛋白质有较好的分辨率，根据你给的10%SDS胶分不开的结果，建议你用上述的浓度试试。
对于你表达的蛋白质浓度很低，建议你用银染，或者免 ...

靠改变胶浓度的方法来分这么靠近的蛋白很困难啊。

LZ要是用E.coli表达的蛋白，还是想想怎么提高表达量吧。这样低的表达量对于以后的提纯很困难滴。。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

7楼2009-06-25 11:15:53

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