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bbyu007木虫 (正式写手)
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【求助啊~~~】mRNA的分离和浓缩~~~
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（1）本人欲构建小麦叶片cDNA文库，Trizol提取总RNA后（浓度达到了3 ug/ul ，260/280=1.9，260/230=2.0），用Promega磁珠分离mRNA得率超级超级低，而且260/280=1，260/230=0.3，相当惨淡。。。 （附图在下面）求助：Promega的这个mRNA分离试剂盒操作时需注意什么？有诀窍吗？不过不用这个试剂盒，我该用哪种mRNA分离的试剂盒能得到比较好的结果？（要求：纯度高、量大） （2）另外，构建cDNA文库我打算用clontech cDNA合成试剂盒，要求mRNA的起始量为 1 ug/ul，所以，我需要将分离得到的mRNA浓缩，但是，用异丙醇（或乙醇）+醋酸钠沉淀浓缩后得率太少；或者用冷冻抽真空浓缩后盐离子浓度太高进而影响接下来的反转和PCR。。。（我居然连tubulin都没扩出来。。。  ）求助：我该通过什么方法浓缩分离后得到的mRNA？（要求：不降解、去盐） 在线等~~~~~~~~~~~！！！  [ Last edited by bbyu007 on 2009-6-24 at 17:12 ] |
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