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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助啊~~~】mRNA的分离和浓缩~~~
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bbyu007

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助啊~~~】mRNA的分离和浓缩~~~

（1）本人欲构建小麦叶片cDNA文库，Trizol提取总RNA后（浓度达到了3 ug/ul ，260/280=1.9，260/230=2.0），用Promega磁珠分离mRNA得率超级超级低，而且260/280=1，260/230=0.3，相当惨淡。。。（附图在下面）

求助：Promega的这个mRNA分离试剂盒操作时需注意什么？有诀窍吗？不过不用这个试剂盒，我该用哪种mRNA分离的试剂盒能得到比较好的结果？（要求：纯度高、量大）

（2）另外，构建cDNA文库我打算用clontech cDNA合成试剂盒，要求mRNA的起始量为 1 ug/ul，所以，我需要将分离得到的mRNA浓缩，但是，用异丙醇（或乙醇）+醋酸钠沉淀浓缩后得率太少；或者用冷冻抽真空浓缩后盐离子浓度太高进而影响接下来的反转和PCR。。。（我居然连tubulin都没扩出来。。。）

求助：我该通过什么方法浓缩分离后得到的mRNA？（要求：不降解、去盐）

在线等~~~~~~~~~~~！！！

[ Last edited by bbyu007 on 2009-6-24 at 17:12 ]
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我是笨笨鱼~~~
1楼 2009-06-24 17:06:57
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thaw

铜虫 (小有名气)
★
bbyu007(金币+1,VIP+0):你就是个菜~~~~~~！！！！ 6-24 18:42
爱莫能助啊
俺没做过
BLESS u 小菜菜

[ Last edited by thaw on 2009-6-24 at 20:33 ]
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2楼2009-06-24 18:08:21
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bbyu007

木虫 (正式写手)
没人么？
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我是笨笨鱼~~~
3楼2009-06-25 08:56:15
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
友情顶
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4楼2009-06-25 09:52:41
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bbyu007

木虫 (正式写手)
还没人啊？
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我是笨笨鱼~~~
5楼2009-06-25 15:58:12
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thaw

铜虫 (小有名气)
★
bbyu007(金币+1,VIP+0): 11-23 01:01
免费帮顶
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6楼2009-06-26 13:02:58
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bbyu007

木虫 (正式写手)
还没人~~我实验都卡在这里卡了1个月了~~~~伤心ing。。。
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我是笨笨鱼~~~
7楼2009-06-30 13:44:02
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w.king124

金虫 (正式写手)
爱莫能助，友情顶！
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8楼2009-06-30 14:19:54
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
bbyu007(金币+1,VIP+0):谢谢，已经在重新提了 7-2 09:51
你的总RNA提的不是很理想，有降解。建议重新提取。
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9楼2009-07-01 16:30:54
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