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bbyu007

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助啊~~~】mRNA的分离和浓缩~~~

(1)本人欲构建小麦叶片cDNA文库,Trizol提取总RNA后(浓度达到了3 ug/ul ,260/280=1.9,260/230=2.0),用Promega磁珠分离mRNA得率超级超级低,而且260/280=1,260/230=0.3,相当惨淡。。。(附图在下面)

求助:Promega的这个mRNA分离试剂盒操作时需注意什么?有诀窍吗?不过不用这个试剂盒,我该用哪种mRNA分离的试剂盒能得到比较好的结果?(要求:纯度高、量大)

(2)另外,构建cDNA文库我打算用clontech cDNA合成试剂盒,要求mRNA的起始量为 1 ug/ul,所以,我需要将分离得到的mRNA浓缩,但是,用异丙醇(或乙醇)+醋酸钠沉淀浓缩后得率太少;或者用冷冻抽真空浓缩后盐离子浓度太高进而影响接下来的反转和PCR。。。(我居然连tubulin都没扩出来。。。

求助:我该通过什么方法浓缩分离后得到的mRNA?(要求:不降解、去盐)

在线等~~~~~~~~~~~!!!

[ Last edited by bbyu007 on 2009-6-24 at 17:12 ]
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我是笨笨鱼~~~
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w.king124

金虫 (正式写手)


爱莫能助,友情顶!
8楼2009-06-30 14:19:54
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thaw

铜虫 (小有名气)


bbyu007(金币+1,VIP+0):你就是个菜~~~~~~!!!! 6-24 18:42
爱莫能助啊
俺没做过
BLESS u 小菜菜

[ Last edited by thaw on 2009-6-24 at 20:33 ]
2楼2009-06-24 18:08:21
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bbyu007

木虫 (正式写手)

还没人~~我实验都卡在这里卡了1个月了~~~~伤心ing。。。
我是笨笨鱼~~~
7楼2009-06-30 13:44:02
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


bbyu007(金币+1,VIP+0):谢谢,已经在重新提了 7-2 09:51
你的总RNA提的不是很理想,有降解。建议重新提取。
9楼2009-07-01 16:30:54
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