24小时热门版块排行榜    

查看: 1151  |  回复: 14
当前主题已经存档。

linglan2612

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dailei1983 at 2009-6-24 15:46:



谢谢,我看了一个论文里也是这么做的,我试试看。不知你有没有做过大提呢,我是用的100mlLB摇的菌液,还有请问一下你加溶菌酶和溶葡萄球菌素的浓度都是多大啊。

做过大提,也是100毫升,是将我的目的基因上到pMAD载体上,然后转金葡RN4220菌(修饰菌株),然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提,然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒提取试剂盒的柱子上,用去蛋白液再洗一次,接下来就用试剂盒里的漂洗液洗柱子……效果还好,但是的确不能和G-菌提质粒的质量相比,不过已经够酶切用了哦。
不知道您下游准备做什么工作,其实我也是微生物的新手,做分子生物学的实验仅1年的时间,许多方法并不一定对,希望能对您的实验有一点点帮助而不是添乱,嘿嘿。
另外溶葡球菌酶的浓度是1mg/mL,普通溶菌酶的浓度是50mg/mL
任务分解,做好计划,减少情绪对抗
11楼2009-06-25 10:45:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-6-24 16:50:
翻到文献了,o(∩_∩)o...上传到nami盘了,链接如下:

http://www.namipan.com/d/2089.pd ... 7ecc573bc3fad490700

很有帮助,谢谢!
12楼2009-06-25 11:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

如果抗氯霉素,可以用氯霉素刺激增加拷贝数
13楼2009-06-25 14:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by linglan2612 at 2009-6-25 10:45:


做过大提,也是100毫升,是将我的目的基因上到pMAD载体上,然后转金葡RN4220菌(修饰菌株),然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提,然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒 ...

我是做细菌耐药性的,提取质粒后把质粒电转化到RN4220里,用抗生素筛选含有耐药基因质粒的RN4220电转子,再提取耐药质粒做下游的实验。其他种的葡萄球菌还行,就是金黄色葡萄球菌提的效果不好。我是用的qiagen小提和中提的盒子。
14楼2009-06-25 14:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

我提质粒是按照qiagen说明书上说的挑取单克隆到1ml 含抗生素LB中,活化8小时之后,吸取100微升到100毫升含抗生素LB中,250rpm震摇12小时到对数生长期后期提取质粒。按照说明书上说12-16小时收集下来的沉淀大概是3g/L培养基,我今天按我100ml收集的菌液沉淀换算一下,足有11g/L培养基,远高于它的要求。下次我只取30ml菌液离心收集沉淀再提一下,看会不会好点。
15楼2009-06-25 14:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dailei1983 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 0805 316求调剂 +6 大雪深藏 2026-03-18 6/300 2026-03-24 22:13 by peike
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-23 3/150 2026-03-24 20:25 by 汪!?!
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 7/350 2026-03-24 15:24 by cuifj
[考研] 一志愿华东理工大学081700,初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见