24小时热门版块排行榜    

查看: 1264  |  回复: 14
当前主题已经存档。

linglan2612

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dailei1983 at 2009-6-24 15:46:



谢谢,我看了一个论文里也是这么做的,我试试看。不知你有没有做过大提呢,我是用的100mlLB摇的菌液,还有请问一下你加溶菌酶和溶葡萄球菌素的浓度都是多大啊。

做过大提,也是100毫升,是将我的目的基因上到pMAD载体上,然后转金葡RN4220菌(修饰菌株),然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提,然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒提取试剂盒的柱子上,用去蛋白液再洗一次,接下来就用试剂盒里的漂洗液洗柱子……效果还好,但是的确不能和G-菌提质粒的质量相比,不过已经够酶切用了哦。
不知道您下游准备做什么工作,其实我也是微生物的新手,做分子生物学的实验仅1年的时间,许多方法并不一定对,希望能对您的实验有一点点帮助而不是添乱,嘿嘿。
另外溶葡球菌酶的浓度是1mg/mL,普通溶菌酶的浓度是50mg/mL
任务分解,做好计划,减少情绪对抗
11楼2009-06-25 10:45:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-6-24 16:50:
翻到文献了,o(∩_∩)o...上传到nami盘了,链接如下:

http://www.namipan.com/d/2089.pd ... 7ecc573bc3fad490700

很有帮助,谢谢!
12楼2009-06-25 11:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

如果抗氯霉素,可以用氯霉素刺激增加拷贝数
13楼2009-06-25 14:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by linglan2612 at 2009-6-25 10:45:


做过大提,也是100毫升,是将我的目的基因上到pMAD载体上,然后转金葡RN4220菌(修饰菌株),然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提,然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒 ...

我是做细菌耐药性的,提取质粒后把质粒电转化到RN4220里,用抗生素筛选含有耐药基因质粒的RN4220电转子,再提取耐药质粒做下游的实验。其他种的葡萄球菌还行,就是金黄色葡萄球菌提的效果不好。我是用的qiagen小提和中提的盒子。
14楼2009-06-25 14:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

我提质粒是按照qiagen说明书上说的挑取单克隆到1ml 含抗生素LB中,活化8小时之后,吸取100微升到100毫升含抗生素LB中,250rpm震摇12小时到对数生长期后期提取质粒。按照说明书上说12-16小时收集下来的沉淀大概是3g/L培养基,我今天按我100ml收集的菌液沉淀换算一下,足有11g/L培养基,远高于它的要求。下次我只取30ml菌液离心收集沉淀再提一下,看会不会好点。
15楼2009-06-25 14:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dailei1983 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 25/1250 2026-08-16 10:53 by hmhminy
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见