应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 金黄色葡萄球菌质粒提取问题
52/1返回列表
查看: 1126  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

[交流] 金黄色葡萄球菌质粒提取问题

最近一直在做葡萄球菌质粒的提取，第一步裂解用过溶菌酶，也用过溶葡萄球菌素（lysostaphin），但就是效果不太好。我要提的质粒是耐药菌株的质粒，不是工程质粒，比较大，估计拷贝数也比较低。大家有做过的能不能介绍一下经验，有哪些关键环节值得注意呢？十分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-06-23 16:06:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by linglan2612 at 2009-6-25 10:45:


做过大提，也是100毫升，是将我的目的基因上到pMAD载体上，然后转金葡RN4220菌（修饰菌株），然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提，然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒 ...

我是做细菌耐药性的，提取质粒后把质粒电转化到RN4220里，用抗生素筛选含有耐药基因质粒的RN4220电转子，再提取耐药质粒做下游的实验。其他种的葡萄球菌还行，就是金黄色葡萄球菌提的效果不好。我是用的qiagen小提和中提的盒子。
赞一下 回复此楼
14楼2009-06-25 14:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
拷贝数低的话尝试一下培养时加青霉素可以提高拷贝数
赞一下(1人) 回复此楼
平和悦衲！
2楼2009-06-23 18:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)
我在LB里添加了抗生素，但是效果还是不明显。我觉得主要问题在裂解这一步。金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌有细胞壁，不像大肠杆菌可以直接进行碱裂解，而是在裂解前加入溶菌酶或溶葡萄球菌素破壁再按常规操作。但是我都试过了，效果很不好，不是裂解不完全，就是最后质粒提出来有降解，其他葡萄球菌还好，就是金黄色葡萄球菌怎么都提不出来。真郁闷！
赞一下 回复此楼
3楼2009-06-23 22:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林祎

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以增加裂解液的量延长裂解时间
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-06-23 23:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭