24小时热门版块排行榜    

查看: 1108  |  回复: 14
当前主题已经存档。

dailei1983

金虫 (初入文坛)

[交流] 金黄色葡萄球菌质粒提取问题

最近一直在做葡萄球菌质粒的提取,第一步裂解用过溶菌酶,也用过溶葡萄球菌素(lysostaphin),但就是效果不太好。我要提的质粒是耐药菌株的质粒,不是工程质粒,比较大,估计拷贝数也比较低。大家有做过的能不能介绍一下经验,有哪些关键环节值得注意呢?十分感谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

质粒提取

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by linglan2612 at 2009-6-24 11:34:
我之前做的时候也同样遇到类似的问题,有一点点体会就是菌体量不能太大,比如摇5毫升的菌液,收集菌体时就分别收集在5个EP管里,把普通溶菌酶和溶葡球菌酶都加,作用的时间也相应延长,然后用试剂盒提,一般去蛋白 ...

谢谢,我看了一个论文里也是这么做的,我试试看。不知你有没有做过大提呢,我是用的100mlLB摇的菌液,还有请问一下你加溶菌酶和溶葡萄球菌素的浓度都是多大啊。
7楼2009-06-24 15:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
拷贝数低的话尝试一下培养时加青霉素可以提高拷贝数
平和悦衲!
2楼2009-06-23 18:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

我在LB里添加了抗生素,但是效果还是不明显。我觉得主要问题在裂解这一步。金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌有细胞壁,不像大肠杆菌可以直接进行碱裂解,而是在裂解前加入溶菌酶或溶葡萄球菌素破壁再按常规操作。但是我都试过了,效果很不好,不是裂解不完全,就是最后质粒提出来有降解,其他葡萄球菌还好,就是金黄色葡萄球菌怎么都提不出来。真郁闷!
3楼2009-06-23 22:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林祎

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以增加裂解液的量延长裂解时间
4楼2009-06-23 23:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linglan2612

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-24 15:55
我之前做的时候也同样遇到类似的问题,有一点点体会就是菌体量不能太大,比如摇5毫升的菌液,收集菌体时就分别收集在5个EP管里,把普通溶菌酶和溶葡球菌酶都加,作用的时间也相应延长,然后用试剂盒提,一般去蛋白液会洗2次,最后过柱时就将5管的上清只过一个柱子,再进行最后的洗脱,呵呵,还是有一点点进步的哦。希望能对你有点点帮助,嘿嘿。
任务分解,做好计划,减少情绪对抗
5楼2009-06-24 11:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


amisking(金币+1,VIP+0):呵呵,赶紧帮忙找找哦! 6-24 15:56
我记得看过nature protocol还是proceeding上的一篇文献,里面也是大质粒的提取,一个改进的方法,回头帮你找找看
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2009-06-24 13:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-6-24 13:51:
我记得看过nature protocol还是proceeding上的一篇文献,里面也是大质粒的提取,一个改进的方法,回头帮你找找看

十分感谢!
8楼2009-06-24 15:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailei1983

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 林祎 at 2009-6-23 23:34:
可以增加裂解液的量延长裂解时间

谢谢!
9楼2009-06-24 15:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翻到文献了,o(∩_∩)o...上传到nami盘了,链接如下:

http://www.namipan.com/d/2089.pd ... 7ecc573bc3fad490700
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2009-06-24 16:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dailei1983 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见