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金黄色葡萄球菌质粒提取问题
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| 最近一直在做葡萄球菌质粒的提取，第一步裂解用过溶菌酶，也用过溶葡萄球菌素（lysostaphin），但就是效果不太好。我要提的质粒是耐药菌株的质粒，不是工程质粒，比较大，估计拷贝数也比较低。大家有做过的能不能介绍一下经验，有哪些关键环节值得注意呢？十分感谢！ |
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linglan2612
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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做过大提，也是100毫升，是将我的目的基因上到pMAD载体上，然后转金葡RN4220菌（修饰菌株），然后从RN4220里提质粒转标准株或临床株。提的时候是先用苯酚氯仿异戊醇抽提，然后将抽提所得上清上到TIANGEN的质粒提取试剂盒的柱子上，用去蛋白液再洗一次，接下来就用试剂盒里的漂洗液洗柱子……效果还好，但是的确不能和G-菌提质粒的质量相比，不过已经够酶切用了哦。 不知道您下游准备做什么工作，其实我也是微生物的新手，做分子生物学的实验仅1年的时间，许多方法并不一定对，希望能对您的实验有一点点帮助而不是添乱，嘿嘿。 另外溶葡球菌酶的浓度是1mg/mL,普通溶菌酶的浓度是50mg/mL |
11楼2009-06-25 10:45:55
haoqian6135
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林祎
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4楼2009-06-23 23:34:26
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