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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教pET28a的插入序列
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stfo

铜虫 (小有名气)

[交流] 求教pET28a的插入序列

我想用EcoRI（上游）和Hind III（下游）这两个位点，请问还用在上游引物前补碱基吗？
我数了一下，好像正好是3的整数倍

请高人赐教
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1楼 2009-06-23 11:24:47
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引入酶切位点后需要加保护碱基
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2楼2009-06-23 11:54:26
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
保护碱基是为了让酶更好的识别酶切位点，所以一般引物都得加保护碱基。
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平和悦衲！
3楼2009-06-23 12:13:17
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hongqing

金虫 (小有名气)

microbiology
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
需要加保护碱基，否则会影响酶切效果！
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4楼2009-06-23 12:13:50
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thaw

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不用加，连载体测序后切下来连
不过如果你想直接PCR切的话就要加保护碱基了，要注意点HindIII不好玩
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5楼2009-06-23 12:18:35
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stfo

铜虫 (小有名气)
酶切的时候肯定是要加保护碱基的

我是想问用这个两个酶切位点的话，在pET28a中，阅读框会不会错位


再次谢谢
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6楼2009-06-23 13:35:44
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
阅读框不会出错
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平和悦衲！
7楼2009-06-23 13:39:52
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thaw

铜虫 (小有名气)
不会出错
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8楼2009-06-23 16:03:02
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馋猫

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
a就是正常阅读框的，b，c都是为移码设计的
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9楼2009-06-23 17:10:15
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stfo

铜虫 (小有名气)
谢谢各位
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10楼2009-06-23 19:51:18
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