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stfo

铜虫 (小有名气)

[交流] 求教pET28a的插入序列

我想用EcoRI(上游)和Hind III(下游)这两个位点,请问还用在上游引物前补碱基吗?
我数了一下,好像正好是3的整数倍

请高人赐教
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引入酶切位点后需要加保护碱基
2楼2009-06-23 11:54:26
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

保护碱基是为了让酶更好的识别酶切位点,所以一般引物都得加保护碱基。
平和悦衲!
3楼2009-06-23 12:13:17
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hongqing

金虫 (小有名气)

microbiology


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
需要加保护碱基,否则会影响酶切效果!
4楼2009-06-23 12:13:50
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thaw

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用加,连载体测序后切下来连
不过如果你想直接PCR切的话就要加保护碱基了,要注意点HindIII不好玩
5楼2009-06-23 12:18:35
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stfo

铜虫 (小有名气)

酶切的时候肯定是要加保护碱基的

我是想问用这个两个酶切位点的话,在pET28a中,阅读框会不会错位


再次谢谢
6楼2009-06-23 13:35:44
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

阅读框不会出错
平和悦衲!
7楼2009-06-23 13:39:52
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thaw

铜虫 (小有名气)

不会出错
8楼2009-06-23 16:03:02
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馋猫

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
a就是正常阅读框的,b,c都是为移码设计的
9楼2009-06-23 17:10:15
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stfo

铜虫 (小有名气)

谢谢各位
10楼2009-06-23 19:51:18
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