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xuox

木虫 (正式写手)


[交流] 在线急助:如何解决琼脂糖珠的吸附问题

实验中使用琼脂糖珠作为固相载体来筛选药物小分子,但是小分子基本上90%都被吸附在琼脂糖珠上面了,请问各位虫友有什么方法可以钝化琼脂糖珠把这种吸附作用的不利影响降低到最小?注:实验体系需要需要酸性条件 ph为5左右~~~补充一下,简单地说就是用琼脂糖珠修饰生物靶分子筛选黄酮类的小分子,在做空白的时候发现在没有固定生物靶分子的糖珠在加入黄酮前后,90%的小分子都被吸附在糖珠上面了没法被分析,我就是想找一种方法把糖珠钝化一下使比较少的黄酮被吸附啊~~

[ Last edited by xuox on 2009-6-23 at 13:46 ]
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HarveyWang

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xuox(金币+1,VIP+0):黄酮类的,极性中等吧,用的是标准品, 6-23 13:50
一点也不具体。

你的小分子是什么一类的化合物?

带电性很强吗?

有机溶剂提取的还是水提的啊?!

不说清楚,没人可以准确回答!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-06-23 12:42:09
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HarveyWang

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海外行者

估计不是吸附,是被困在琼脂糖的小网孔里了。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-06-23 12:43:34
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abcfangli

金虫 (小有名气)

你要把你的情况说清楚,别人才能帮你
4楼2009-06-23 13:17:50
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HarveyWang

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★ ★
xuox(金币+2,VIP+0):我是在ep管里做的,不是过柱子,装柱子的话岂不是用量很大?我用的这种珠子 5ml就三千多,有没有什么方法可以封闭这些小网孔啊? 6-23 20:07
你是在柱子上做的吗?
如果是在烧杯里,这些小分子会被困在琼脂糖的小网孔内,表面上看是被其吸附了。

建议你将珠子装柱子,空白一根,有生物靶分子的一根,用测试样品上柱后,用相关缓冲液20个体积以上冲洗。

缓冲液的选择跟你的小分子与生物靶分子的相互作用类型相关,需要自己设计有针对性的洗脱溶液。
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5楼2009-06-23 17:03:57
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HarveyWang

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海外行者

★ ★ ★ ★ ★
xuox(金币+5,VIP+0):谢谢啦~~我不在上海,但是您说的方法确实很有意思可以考虑自己做一下~~谢谢啦~~ 6-23 21:15
有种注射用的1ml 注射器,可以内装200 uL-400 uL糖珠试试。 最好有蠕动泵来压进缓冲液,这样说不定可以降网格内的小分子给冲出来,而特异结合的则挂柱。

有紫外检测器在线检测最好啦,如果能生成电子文档,结合和洗脱曲线就可以发文章用了!

LZ如果在上海,我可以邀请你来我们实验室看看是什么样子的柱子(我的是大柱子)、检测器和记录软件。

所形成的图谱跟HPLC的类似。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-06-23 21:06:38
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xuox

木虫 (正式写手)


请问一下,可不可以先用一种不影响反应体系的小分子将糖珠的网格什么的全部饱和?然后加入我要做的黄酮类小分子,这样最起码可以保证多数的黄酮不被吸附?不知道可不可行啊?
7楼2009-06-23 21:19:30
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HarveyWang

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海外行者

★ ★ ★ ★
xuox(金币+4,VIP+0): 6-23 22:17
引用回帖:
Originally posted by xuox at 2009-6-23 21:19:
请问一下,可不可以先用一种不影响反应体系的小分子将糖珠的网格什么的全部饱和?然后加入我要做的黄酮类小分子,这样最起码可以保证多数的黄酮不被吸附?不知道可不可行啊?

好像没有可能实现哇,想像一下,就是 说不定0.01 uL的溶液被卡在里面了,这0.01uL的溶液可以同时溶解好多种溶质啊。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
8楼2009-06-23 21:50:16
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xuox

木虫 (正式写手)


恩,有道理,不过现在的一个问题就是关于糖珠分离小分子和大分子的时候,一般书上说的原理都是小分子进入网孔大分子进不去随着流动相而流出,这里涉及的问题就是在统计的层面上来说网孔的大小是比较小只能让小分子进去,还有一个问题就是对于网孔的空间到底可以容纳多少分子?我没查到这个数据,不过粗略地换位考虑的话在小分子过量很多的情况下,小分子可以将网孔填完,当然这个应该是处于一种动态的平衡之中,当加入黄酮之后,至少将有很多的黄酮保留在溶液中,可以这样理解吗?不过可以试一下啊,毕竟这个很容易就实现了,还有就是刚在网上查的对于象用牛血清白蛋白还有三乙醇胺来封闭糖珠,这个封闭的原理是不是只和糖珠上面的一些活性位点作用但对于小分子进入网孔的过程影响很少呢?
9楼2009-06-23 22:17:10
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xuox

木虫 (正式写手)


如果用超滤离心的方法可以将这些小分子洗出来吗?
10楼2009-06-24 09:18:06
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