| 查看: 968 | 回复: 21 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
wfmgood银虫 (小有名气)
|
[交流]
酶切连接4个星期一直没成功，求助
|
||
|
设计引物 上游引物：Primer1 5’-CGggatccGGACCATGACCATGACCCTC-3’ Tm=70.8℃ BamHⅠ 下游引物：Primer2 5’-CCGgaattcTCAGACTGTGGCAGGGAAAC-3’ Tm=67.7℃ EcoRⅠ 用高保真酶扩增目的基因1800bp，电泳鉴定扩增条带大小无误，然后胶回收后双酶切，电泳后再胶回收目的基因；同时BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切载体pcDNA3.1(+)胶回收；试着目的基因和载体以不同的比例进行连接，16度过夜转化感受态细胞，涂板，菌落PCR鉴定阳性克隆，我一般挑40个克隆结果全部是阴性，做了好多次都是这样，很是郁闷，请高手指点一下问题可能出在什么地方？非常感谢 是不是我设计的引物加的保护碱基不对？ |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考
已经有5人回复
-
279求调剂
已经有4人回复
-
284求调剂
已经有8人回复
-
材料复试调剂
已经有4人回复
-
本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分
已经有7人回复
-
求调剂
已经有6人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有13人回复
-
一志愿郑大材料学硕298分，求调剂
已经有5人回复
-
材料化工调剂
已经有13人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有5人回复
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- BioEPI: 8
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113745
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28937
- 在线: 3679.7小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
3楼2009-06-21 22:58:51
amisking
荣誉版主 (文坛精英)
- 应助: 45 (小学生)
- 贵宾: 28.304
- 金币: 51353.9
- 散金: 3080
- 红花: 78
- 沙发: 17
- 帖子: 13022
- 在线: 839小时
- 虫号: 514230
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
- 管辖: 分子生物
2楼2009-06-21 22:50:15
4楼2009-06-21 23:06:28
cauzhangtao
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4438.5
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 693
- 在线: 129.2小时
- 虫号: 547332
- 注册: 2008-04-17
- 性别: GG
- 专业: 分子与进化生态学
5楼2009-06-21 23:11:38
10