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yedansky

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[交流] 蛋白可溶性表达无活性

有没有可能大肠杆菌在OD600 0.4-0.6
诱导时，少量表达的可溶性蛋白有很高的活性但OD600 值在0.7-0.8或者更高，虽然为可溶性表达，但是无活性，有人有这种情况么

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1楼 2020-01-10 15:26:54

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yedansky

新虫 (著名写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 旭日读书 at 2020-01-10 16:01:09
绝对是自己哪里有问题

我自己没有问题，蛋白在上清中可溶性表达，但就是没有活性除了第一次有活性

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9楼2020-01-17 09:09:53

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旭日读书

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绝对是自己哪里有问题

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2楼2020-01-10 16:01:09

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zsygxh

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西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2020-01-18 20:28:23

关系应该不大。
1. 首先蛋白可溶并不代表蛋白处于天然结构，它可以是可溶性多聚体，也可以是多种结构的混合物，虽然没有沉淀，但有可能活性位点被包埋或活性位点的氨基酸侧链空间位置变化而没有活性，这跟蛋白性质有关，所以即使可溶活性也可能很低甚至无活性。
2. 蛋白可能存在必要的修饰才有活性，原核表达系统无法完成，查文献自行确认。
3. 缺乏辅因子，查文献自行确认。

建议纯化以后跑一下HPLC，先确认样品是否为单一结构。另外，确认一下序列里有没有cys，如果有确认cys是形成二硫键还是参与金属离子配位的，如果没有尝试融合不同标签表达。
总之，优先尝试通过可溶表达获得天然构象的蛋白，不行尝试复性。

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3楼2020-01-10 17:09:02

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