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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酪蛋白溶液中加入三氯乙酸，怎么没有沉淀生成
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erping80

新虫 (小有名气)

[交流] 酪蛋白溶液中加入三氯乙酸，怎么没有沉淀生成

按照国标，用福林酚法测蛋白酶活力，实验重复性很差，后来发现，酪蛋白溶液中加入三氯乙酸后，并没有沉淀生成，请问可能是什么原因呢？
三氯乙酸和酪蛋白都不是容易变质的试剂啊，重新配制也不行，求助各位大侠，实验没法往下做了

[ Last edited by erping80 on 2009-6-19 at 17:28 ]
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1楼 2009-06-19 17:25:52
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
erping80(金币+1,VIP+0): 6-24 08:36
酪蛋白还是酪蛋白水解物
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2楼2009-06-19 20:47:10
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erping80

新虫 (小有名气)
买的试剂是酪蛋白。
不过后来我加了盐酸进去，也没有沉淀生成，应该是酪蛋白出问题了
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3楼2009-06-22 17:02:48
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wujia115

铁杆木虫 (著名写手)
★
erping80(金币+1,VIP+0): 6-24 08:37
也许是酪蛋白没有溶解。溶解酪蛋白时要加碱才好溶。例如：
0.5%酪蛋白溶液：称取酪蛋白（干酪素）0.25g放入50mL容量瓶中，加入约20mL水，再准确加入1mol/L NaOH 5mL，当酪蛋白溶解后，准确加入1mol/L乙酸5mL，最后加水稀释定容至50mL，充分摇匀。
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4楼2009-06-23 13:13:11
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erping80

新虫 (小有名气)
ls，我加了0.1mol/L NaOH 10mL,用磷酸缓冲液定容的
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5楼2009-06-24 08:36:06
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apple2001

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议测下pH。
三氯乙酸的浓度是不是要调整呢？还有就是，你的蛋白的浓度是否很高，可以观察到沉淀呢？要不要离心看看？
友情提醒，不要沾到三氯乙酸了，小心蜕皮：）
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自强不吸，厚德载雾。
6楼2009-06-25 22:29:19
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bulebird

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
配制酪蛋白溶液时，测酸性蛋白酶要加入几滴乳酸在沸水浴中进行溶解，一定要溶解至澄清状，溶解冷却至室温后要调节一下pH，要与所用缓冲液的pH基本一致。如果溶解充分，再加入三氯乙酸后还没有沉淀沉声的话，那肯定就是酪素的问题了。酪素有几种，并不是所有的酪素都适合用来测蛋白酶活性的，一定要选好了。
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7楼2009-06-29 13:40:31
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