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erping80

新虫 (小有名气)

[交流] 酪蛋白溶液中加入三氯乙酸,怎么没有沉淀生成

按照国标,用福林酚法测蛋白酶活力,实验重复性很差,后来发现,酪蛋白溶液中加入三氯乙酸后,并没有沉淀生成,请问可能是什么原因呢?
三氯乙酸和酪蛋白都不是容易变质的试剂啊,重新配制也不行,求助各位大侠,实验没法往下做了

[ Last edited by erping80 on 2009-6-19 at 17:28 ]
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


erping80(金币+1,VIP+0): 6-24 08:36
酪蛋白还是酪蛋白水解物
2楼2009-06-19 20:47:10
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erping80

新虫 (小有名气)

买的试剂是酪蛋白。
不过后来我加了盐酸进去,也没有沉淀生成,应该是酪蛋白出问题了
3楼2009-06-22 17:02:48
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wujia115

铁杆木虫 (著名写手)


erping80(金币+1,VIP+0): 6-24 08:37
也许是酪蛋白没有溶解。溶解酪蛋白时要加碱才好溶。例如:
0.5%酪蛋白溶液:称取酪蛋白(干酪素)0.25g放入50mL容量瓶中,加入约20mL水,再准确加入1mol/L NaOH 5mL,当酪蛋白溶解后,准确加入1mol/L乙酸5mL,最后加水稀释定容至50mL,充分摇匀。
4楼2009-06-23 13:13:11
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erping80

新虫 (小有名气)

ls,我加了0.1mol/L NaOH 10mL,用磷酸缓冲液定容的
5楼2009-06-24 08:36:06
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apple2001

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议测下pH。
三氯乙酸的浓度是不是要调整呢?还有就是,你的蛋白的浓度是否很高,可以观察到沉淀呢?要不要离心看看?
友情提醒,不要沾到三氯乙酸了,小心蜕皮:)
自强不吸,厚德载雾。
6楼2009-06-25 22:29:19
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bulebird

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
配制酪蛋白溶液时,测酸性蛋白酶要加入几滴乳酸在沸水浴中进行溶解,一定要溶解至澄清状,溶解冷却至室温后要调节一下pH,要与所用缓冲液的pH基本一致。如果溶解充分,再加入三氯乙酸后还没有沉淀沉声的话,那肯定就是酪素的问题了。酪素有几种,并不是所有的酪素都适合用来测蛋白酶活性的,一定要选好了。
7楼2009-06-29 13:40:31
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