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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？
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xiaofan66

[交流] 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？

蓝白筛选后，挑取白斑，然后过夜摇菌，可进行菌液PCR后却没有目的片段，是哪步出现问题了 ？

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1楼 2009-06-19 10:23:31
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350784478

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是PCR出了问题，不过蓝白斑筛选过程中，即使你挑选白斑，也不代表你的目的基因就是插入进去了。总的说来，我觉得还是PCR可能没有做好。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2009-06-19 11:29:34
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
菌液PCR可行性不是很大，即p不出目的片段的可能性很大，建议提质粒做酶切鉴定，或以质粒为模板做pcr鉴定，可能成功性更大。
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Thank-you，so-blue.
2楼2009-06-19 10:47:53
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ilaveu

木虫 (著名写手)
直接菌落PCR不行吗？
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4楼2009-06-19 13:10:22
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接用m13引物做菌落pcr，能p出大于150bp的，基本就是连进去了。非常快
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5楼2009-06-19 13:13:44
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