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xiaofan66

[交流] 蓝白筛选后,菌液PCR没有目的片段,求助?

蓝白筛选后,挑取白斑,然后过夜摇菌,可进行菌液PCR后却没有目的片段,是哪步出现问题了 ?

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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

菌液PCR可行性不是很大,即p不出目的片段的可能性很大,建议提质粒做酶切鉴定,或以质粒为模板做pcr鉴定,可能成功性更大。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-06-19 10:47:53
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350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是PCR出了问题,不过蓝白斑筛选过程中,即使你挑选白斑,也不代表你的目的基因就是插入进去了。总的说来,我觉得还是PCR可能没有做好。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
3楼2009-06-19 11:29:34
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ilaveu

木虫 (著名写手)

直接菌落PCR不行吗?
4楼2009-06-19 13:10:22
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接用m13引物做菌落pcr,能p出大于150bp的,基本就是连进去了。非常快
5楼2009-06-19 13:13:44
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bbyu007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
歇一段再做,就做出来了
我是笨笨鱼~~~
6楼2009-06-19 14:27:14
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gogo926

银虫 (小有名气)

白斑是假阳性吧
7楼2009-06-19 17:47:47
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用酚/氯仿快速鉴定,几分钟,然后跑胶,以空载体为对照,如果条带高于对照,即目的片断插入载体中。这种方法简便直观。
8楼2009-06-19 18:09:33
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wjg_1979

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有两种可能P不出来:一是这个菌是假阳性的,二是你的PCR出问题,这个好解决,你再做一次PCR就行.
总的解决方按是:多挑几个克隆,10个,然后再做PCR,或者抽出质粒来做PCR(这个比较保险些).
9楼2009-06-20 10:18:24
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