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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？
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xiaofan66

[交流] 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？

蓝白筛选后，挑取白斑，然后过夜摇菌，可进行菌液PCR后却没有目的片段，是哪步出现问题了 ？

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1楼 2009-06-19 10:23:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
菌液PCR可行性不是很大，即p不出目的片段的可能性很大，建议提质粒做酶切鉴定，或以质粒为模板做pcr鉴定，可能成功性更大。
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Thank-you，so-blue.
2楼2009-06-19 10:47:53
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350784478

木虫 (正式写手)
★
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应该是PCR出了问题，不过蓝白斑筛选过程中，即使你挑选白斑，也不代表你的目的基因就是插入进去了。总的说来，我觉得还是PCR可能没有做好。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2009-06-19 11:29:34
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ilaveu

木虫 (著名写手)
直接菌落PCR不行吗？
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4楼2009-06-19 13:10:22
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接用m13引物做菌落pcr，能p出大于150bp的，基本就是连进去了。非常快
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5楼2009-06-19 13:13:44
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
歇一段再做，就做出来了
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我是笨笨鱼~~~
6楼2009-06-19 14:27:14
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gogo926

银虫 (小有名气)
白斑是假阳性吧
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7楼2009-06-19 17:47:47
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用酚/氯仿快速鉴定，几分钟，然后跑胶，以空载体为对照，如果条带高于对照，即目的片断插入载体中。这种方法简便直观。
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8楼2009-06-19 18:09:33
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wjg_1979

木虫 (小有名气)
★
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有两种可能Ｐ不出来：一是这个菌是假阳性的，二是你的ＰＣＲ出问题，这个好解决，你再做一次PCR就行.
总的解决方按是:多挑几个克隆,10个,然后再做PCR,或者抽出质粒来做PCR(这个比较保险些).
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9楼2009-06-20 10:18:24
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