应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？
91/1返回列表
查看: 707  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiaofan66

[交流] 蓝白筛选后，菌液PCR没有目的片段，求助？

蓝白筛选后，挑取白斑，然后过夜摇菌，可进行菌液PCR后却没有目的片段，是哪步出现问题了 ？

在线等候！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-06-19 10:23:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
菌液PCR可行性不是很大，即p不出目的片段的可能性很大，建议提质粒做酶切鉴定，或以质粒为模板做pcr鉴定，可能成功性更大。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2009-06-19 10:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

350784478

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是PCR出了问题，不过蓝白斑筛选过程中，即使你挑选白斑，也不代表你的目的基因就是插入进去了。总的说来，我觉得还是PCR可能没有做好。
赞一下(1人) 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2009-06-19 11:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilaveu

木虫 (著名写手)
直接菌落PCR不行吗？
赞一下 回复此楼
4楼2009-06-19 13:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接用m13引物做菌落pcr，能p出大于150bp的，基本就是连进去了。非常快
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-06-19 13:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
歇一段再做，就做出来了
赞一下(1人) 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
6楼2009-06-19 14:27:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gogo926

银虫 (小有名气)
白斑是假阳性吧
回复此楼
7楼2009-06-19 17:47:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用酚/氯仿快速鉴定，几分钟，然后跑胶，以空载体为对照，如果条带高于对照，即目的片断插入载体中。这种方法简便直观。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-06-19 18:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjg_1979

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有两种可能Ｐ不出来：一是这个菌是假阳性的，二是你的ＰＣＲ出问题，这个好解决，你再做一次PCR就行.
总的解决方按是:多挑几个克隆,10个,然后再做PCR,或者抽出质粒来做PCR(这个比较保险些).
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-06-20 10:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaofan66 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭