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求学1

新虫 (小有名气)

[求助] pcp20质粒转化 已有3人参与

求助各位大神,red同源重组后,转化pcp20质粒到大肠去除km抗性,但是一直都转不进去,电转和热激都尝试了,都不行,不知道什么原因,请各位大神施于援手

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匿名

用户注销 (正式写手)

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3楼2020-01-02 18:00:52
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先确定质粒有没有问题(是否是pCP20,浓度有多高),另外转化后复苏和涂板的抗性和温度是否有问题,转化pKD46效率低的倒是有,pCP20转化率低的挺少的。
2楼2020-01-02 17:59:42
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


crispr敲除会比较方便快捷

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4楼2020-01-02 21:11:49
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求学1

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 雨独步 at 2020-01-02 17:59:42
首先确定质粒有没有问题(是否是pCP20,浓度有多高),另外转化后复苏和涂板的抗性和温度是否有问题,转化pKD46效率低的倒是有,pCP20转化率低的挺少的。

怀疑质粒有过问题,就转了T1做对照,一点问题都没有,也怕涂板有问题,玻璃珠和玻璃棒都有做对照,也没有问题,复苏基本上就是30℃,1-2小时,感觉哪里都没问题,就是转不进去,非常感谢回复

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5楼2020-01-03 08:44:48
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