应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于使用自杀质粒pK18SacB进行敲除受体菌基因组上的相关片段
52/1返回列表
查看: 5112  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

supergrape

金虫 (小有名气)

[求助] 关于使用自杀质粒pK18SacB进行敲除受体菌基因组上的相关片段 已有2人参与

RT，我在前期将pK18SacB进行改造，把卡那霉素基因替换为氯霉素（受体菌带有卡那霉素抗性），左右同源臂的长度大小是在500bp左右，构建好的自杀载体pK18SacB是利用大肠杆菌S17进行接合转移，将滤膜上的菌体洗脱后涂到含有卡那霉素和氯霉素的培养基上。双抗板上确实长出疑似单交换的菌株（受体菌是假单胞菌，菌落形态与大肠杆菌不一样，很容易分辨），同时涂到双抗板上的受体菌没有长。问题是，当我用左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物进行菌落PCR验证，结果只有一左同源臂+右同源臂的目的条带，没有左同源臂+敲除片段+右同源臂的目的条带（PCR延伸时间是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂的长度进行设置的）。随后，我设计了基因组上左同源臂的上游引物+自杀质粒中右同源臂下游引物进行pcr，结果没有相关目的条带（PCR延伸时间是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂+300 bp的长度进行设置的）。恳请大佬解释一下，双抗板上的菌株是单交换的菌株吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-01-01 14:44:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

茶白不是白

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我最近也要做铜绿假单胞菌某一基因敲除，很多不太懂，请问可以和您交流一下吗？
赞一下 回复此楼
凡是过往，皆为序章
13楼2020-12-02 15:28:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
随机整合的单交换

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2020-01-01 21:13:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
supergrape: 金币+100, ★有帮助 2020-01-12 20:21:20
左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物 PCR 产物送测序，如果是你设计的同源臂，那应该是成功的
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

supergrape
3楼2020-01-02 19:54:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

supergrape

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2020-01-01 21:13:28
随机整合的单交换

随机整合的单交换会出现我基因组上原有的片段，即左同源臂+敲除片段+右同源臂

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-01-02 23:05:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +5 秋有木北 2026-03-14 5/250 2026-03-14 09:50 by 30660438
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 求调剂 +4 snw石 2026-03-07 4/200 2026-03-14 05:27 by JourneyLucky
[考研] 325求调剂 +3 微胖瓦片 2026-03-07 3/150 2026-03-14 05:04 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 。。陈 2026-03-08 3/150 2026-03-14 04:50 by JourneyLucky
[考研] 269求调剂 +4 朔朔话 2026-03-08 5/250 2026-03-14 04:43 by JourneyLucky
[考研] 347求调剂 +3 vevee 2026-03-08 3/150 2026-03-14 03:38 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 化学调剂0703 +4 啊我我的 2026-03-11 4/200 2026-03-13 18:35 by ms629
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:14 by userper
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考博] 2026博士申请 +7 起泡酒 2026-03-08 7/350 2026-03-13 09:56 by mumu真真
[考研] 0817学硕华东区求调剂 +3 30660438 2026-03-08 3/150 2026-03-10 16:55 by Pegasus0429
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭