24小时热门版块排行榜    

查看: 3244  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

婉柳

新虫 (小有名气)

[求助] 胶回收没有条带 已有3人参与

胶回收的时候,用的是1%的琼脂糖凝胶电泳,0.2g琼脂糖,20mlTBE,用一厘米左右的梳子。上样的时候,上样量20微升,配1微升loading buffer,按试剂盒上操作的,回收后,没有条带。是不是buffer太少了,上样量了不够,浓度太低了?还有在紫外灯下切胶时间有3-4分钟,时间太长是不是也有影响?还有其他什么原因,分析不出来了,请各位老师,大神指教

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婉柳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 雨独步 at 2019-12-29 20:08:05
loading buffer稀释到1*就行,比如我们用的6*的,就是加五分之一的loading。1CM的孔,加50ul没问题,我们最大的孔可以加100ul。切胶时间稍微长了一点有可能导致DNA突变,但基本不会影响回收。如果切胶时条带很亮,但 ...

谢谢指点,W2是加过酒精的,我明天再试试

发自小木虫Android客户端
8楼2019-12-29 20:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:08:36
一个孔太少了,本来胶回收率就10%左右,多上样几个孔回收就好了

发自小木虫Android客户端
2楼2019-12-29 18:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

婉柳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-12-29 18:35:54
一个孔太少了,本来胶回收率就10%左右,多上样几个孔回收就好了

明天试试多加几个孔。如果想省点事的话,一个空最多可以加多少量的样,把pcr产物混合均匀,加到一个孔里,可以么?另外,一个孔里加多少微升loadong buffer合适?

发自小木虫Android客户端
3楼2019-12-29 19:26:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 婉柳 at 2019-12-29 19:26:15
明天试试多加几个孔。如果想省点事的话,一个空最多可以加多少量的样,把pcr产物混合均匀,加到一个孔里,可以么?另外,一个孔里加多少微升loadong buffer合适?
...

loading buffer 按照说明书指导来,另外大孔胶可以加样50ul

发自小木虫Android客户端
4楼2019-12-29 19:30:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见