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nanjixing000

银虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

[交流] 如何增加PCR特异性

最近用TAKARA的TAQ酶做PCR时总是条带特异性特别差，本该是一个条带的泳道上往往出现很多条带，自己也尝试了一些方式进行优化，但效果不明显。
请教有经验的虫友，从哪些方面可有效地提高PCR的特异性？

[ Last edited by amisking on 2009-6-12 at 07:59 ]

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1楼 2009-06-11 23:00:23

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huangdi5217

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 微生物遗传育种学

★
nanjixing000(金币+1):谢谢参与

引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0.1到0.5μM。较高的引物浓度会导致非特异性产物扩增。另外，细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。还有就是退火温度，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。