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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 镍柱纯化蛋白
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哟呵——

新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白 已有2人参与

镍柱纯化蛋白
过镍柱的时候蛋白在流穿液里面大量存在，洗脱液里面少量存在，不同浓度的咪唑洗脱液里面没有蛋白。蛋白应该是没有结合到镍柱上，请问是什么原因啊

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1楼 2019-12-05 14:56:17
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千纯生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

HIS-tag标签蛋白纯化不挂柱，首先考虑蛋白上面是 否有his-tag，这个可以通过WB做验证；其次考虑his-tag是否被包裹了，导致不能挂柱，可以通过加4-8M尿素到蛋白溶液后，再挂柱子试一试；另外还要考虑，超声时候功率是否合适，纯化过程buffer是否合适，填料性能等因素
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4楼2020-05-21 23:32:23
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Narozm

新虫 (小有名气)
柱子用久了结合能力差。重生或者换新的试试。或者试试别人的蛋白。确定是你样品问题还是柱子问题

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2楼2019-12-05 15:25:32
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
试试purimag的Ni磁珠
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3楼2019-12-05 22:11:59
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Cube生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、推荐使用高结合载量80mg/ml的填料，如：Cube 31101;
2、可能是孵育时间太短：需要降低上样量和上样流量；
3、可能是填料中沉积的杂质太多，导致填料结合能力下降：需要及时对填料进行清洗；
4、可能是目的蛋白和填料带相同电荷：更换填料或优化缓冲液；
5、可能是填料没平衡好，未完全解离：增加平衡柱体积数及优化缓冲液。
如果还有具体问题可以去正民德思官网或者库柏生物的微信工作号。
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5楼2020-08-11 15:36:37
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