应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 镍柱纯化蛋白
51/1返回列表
查看: 2081  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

哟呵——

新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白 已有2人参与

镍柱纯化蛋白
过镍柱的时候蛋白在流穿液里面大量存在，洗脱液里面少量存在，不同浓度的咪唑洗脱液里面没有蛋白。蛋白应该是没有结合到镍柱上，请问是什么原因啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-12-05 14:56:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Narozm

新虫 (小有名气)
柱子用久了结合能力差。重生或者换新的试试。或者试试别人的蛋白。确定是你样品问题还是柱子问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-12-05 15:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
试试purimag的Ni磁珠
赞一下 回复此楼
3楼2019-12-05 22:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千纯生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

HIS-tag标签蛋白纯化不挂柱，首先考虑蛋白上面是 否有his-tag，这个可以通过WB做验证；其次考虑his-tag是否被包裹了，导致不能挂柱，可以通过加4-8M尿素到蛋白溶液后，再挂柱子试一试；另外还要考虑，超声时候功率是否合适，纯化过程buffer是否合适，填料性能等因素
赞一下 回复此楼
4楼2020-05-21 23:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cube生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、推荐使用高结合载量80mg/ml的填料，如：Cube 31101;
2、可能是孵育时间太短：需要降低上样量和上样流量；
3、可能是填料中沉积的杂质太多，导致填料结合能力下降：需要及时对填料进行清洗；
4、可能是目的蛋白和填料带相同电荷：更换填料或优化缓冲液；
5、可能是填料没平衡好，未完全解离：增加平衡柱体积数及优化缓冲液。
如果还有具体问题可以去正民德思官网或者库柏生物的微信工作号。
赞一下 回复此楼
5楼2020-08-11 15:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 哟呵—— 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭