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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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哟呵——

新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白 已有2人参与

镍柱纯化蛋白
过镍柱的时候蛋白在流穿液里面大量存在,洗脱液里面少量存在,不同浓度的咪唑洗脱液里面没有蛋白。蛋白应该是没有结合到镍柱上,请问是什么原因啊

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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


试试purimag的Ni磁珠
3楼2019-12-05 22:11:59
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Narozm

新虫 (小有名气)

柱子用久了结合能力差。重生或者换新的试试。或者试试别人的蛋白。确定是你样品问题还是柱子问题

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2楼2019-12-05 15:25:32
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千纯生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

HIS-tag标签蛋白纯化不挂柱,首先考虑蛋白上面是 否有his-tag,这个可以通过WB做验证;其次考虑his-tag是否被包裹了,导致不能挂柱,可以通过加4-8M尿素到蛋白溶液后,再挂柱子试一试;另外还要考虑,超声时候功率是否合适,纯化过程buffer是否合适,填料性能等因素
4楼2020-05-21 23:32:23
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Cube生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、推荐使用高结合载量80mg/ml的填料,如:Cube 31101;
2、可能是孵育时间太短:需要降低上样量和上样流量;
3、可能是填料中沉积的杂质太多,导致填料结合能力下降:需要及时对填料进行清洗;
4、可能是目的蛋白和填料带相同电荷:更换填料或优化缓冲液;
5、可能是填料没平衡好,未完全解离:增加平衡柱体积数及优化缓冲液。
如果还有具体问题可以去正民德思官网或者库柏生物的微信工作号。
5楼2020-08-11 15:36:37
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