| 查看: 1455 | 回复: 2 | |||
[交流]
sgRNA构建建议教程已有1人参与
|
|
sgRNA构建建议教程 1， 引物设计，https://crispr.cos.uni-heidelberg.de/； 2， 引物退火，引物稀释到20nM，正反向引物分别取10ul混合，取0.5-1L水加热到沸腾，混合后引物放入，自然冷却到室温（2-4小时）； 3， 酶切连接，取200ng质粒（不用太多，减少自连），取5ul退火的引物，T4连接酶和内切酶10×bufffer分别取0.5ul，ddH2O补到10ul 4， PCR仪器设置程序（时间紧张可以减少循环数或者减少循环内时间） 1)，37℃ 5min 2)，37℃ 5min 3)，16℃ 10min 第2,3步15-20个循环 4)，16℃ 10min 5， 产物用于转化； 6， PCR检测，用sgRNA引物，配合载体上引物PCR检测； 7， 送测序 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : sgRNA构建建议教程.docx
2019-12-05 09:35:48, 84.52 K
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有254人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
f1789954073y
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1051.1
- 帖子: 281
- 在线: 31.7小时
- 虫号: 4050579
- 注册: 2015-09-03
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2020-05-14 22:51:16
f1789954073y
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1051.1
- 帖子: 281
- 在线: 31.7小时
- 虫号: 4050579
- 注册: 2015-09-03
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2020-05-14 22:51:40