| 查看: 1637 | 回复: 2 | |||
[交流]
sgRNA构建建议教程 已有1人参与
|
|
sgRNA构建建议教程 1， 引物设计，https://crispr.cos.uni-heidelberg.de/； 2， 引物退火，引物稀释到20nM，正反向引物分别取10ul混合，取0.5-1L水加热到沸腾，混合后引物放入，自然冷却到室温（2-4小时）； 3， 酶切连接，取200ng质粒（不用太多，减少自连），取5ul退火的引物，T4连接酶和内切酶10×bufffer分别取0.5ul，ddH2O补到10ul 4， PCR仪器设置程序（时间紧张可以减少循环数或者减少循环内时间） 1)，37℃ 5min 2)，37℃ 5min 3)，16℃ 10min 第2,3步15-20个循环 4)，16℃ 10min 5， 产物用于转化； 6， PCR检测，用sgRNA引物，配合载体上引物PCR检测； 7， 送测序 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : sgRNA构建建议教程.docx
2019-12-05 09:35:48, 84.52 K
» 猜你喜欢
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有154人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
f1789954073y
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1056.1
- 帖子: 282
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 4050579
- 注册: 2015-09-03
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2020-05-14 22:51:16
f1789954073y
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1056.1
- 帖子: 282
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 4050579
- 注册: 2015-09-03
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2020-05-14 22:51:40