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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！！qPCR绝对定量，可以用提取的细菌基因组DNA作为标准品么？
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webbzc

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！qPCR绝对定量，可以用提取的细菌基因组DNA作为标准品么？ 已有1人参与

本人生物小白一枚，最近想用实时荧光定量qPCR对几种细菌DNA进行绝对定量。查到的好多方法都是说，得用目的基因转化的质粒去做标准品，绘制标准曲线。但是本人想直接用提取的细菌基因组DNA（或者用普通PCR产物也就是目的基因）进行定量、倍比稀释作为标准品。但是没有查到相关资料，不知道各位大佬的实验室有没有这样做过，望指教！
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1楼 2019-12-04 23:11:59
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花随人愿

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:11:44
用质粒做标准品，因为质粒浓度是可以精准定量的，这样你的绝对定量才有意义。

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2楼2019-12-04 23:38:27
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webbzc

新虫 (初入文坛)
谢谢，但是最近看到文献中，有直接从标准菌株中提取基因组Dna,定量后倍比稀释作为标准品的。不知道该方法有什么弊端么？

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3楼2019-12-08 21:27:32
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webbzc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 花随人愿 at 2019-12-04 23:38:27
用质粒做标准品，因为质粒浓度是可以精准定量的，这样你的绝对定量才有意义。

谢谢您，但是最近看到文献中，有直接从标准菌株中提取基因组Dna,定量后倍比稀释作为标准品的。不知道该方法有什么弊端么？

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4楼2019-12-08 21:27:57
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E1nstein

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:11:59
可以直接用pcr产物，跑电泳切胶回收目的条带，然后用作标准品，可以一起交流呀

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5楼2019-12-27 17:35:54
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zhttt333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:12:10
用质粒DNA作标准品， 因为长度，DNA非线性等不同于样品，其qpcr efficency 不同于样品而导致结果偏差， 所以用标化的标准菌株中提取基因组dna 作标准品。
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6楼2019-12-29 06:37:52
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tanglianfa

金虫 (著名写手)
同学您好 ，我也是这么想的，方便留下联系方式吗
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7楼2020-09-03 13:05:29
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