应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！！qPCR绝对定量，可以用提取的细菌基因组DNA作为标准品么？
71/1返回列表
查看: 4061  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

webbzc

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！qPCR绝对定量，可以用提取的细菌基因组DNA作为标准品么？ 已有1人参与

本人生物小白一枚，最近想用实时荧光定量qPCR对几种细菌DNA进行绝对定量。查到的好多方法都是说，得用目的基因转化的质粒去做标准品，绘制标准曲线。但是本人想直接用提取的细菌基因组DNA（或者用普通PCR产物也就是目的基因）进行定量、倍比稀释作为标准品。但是没有查到相关资料，不知道各位大佬的实验室有没有这样做过，望指教！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-12-04 23:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花随人愿

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:11:44
用质粒做标准品，因为质粒浓度是可以精准定量的，这样你的绝对定量才有意义。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-12-04 23:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

webbzc

新虫 (初入文坛)
谢谢，但是最近看到文献中，有直接从标准菌株中提取基因组Dna,定量后倍比稀释作为标准品的。不知道该方法有什么弊端么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-12-08 21:27:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

webbzc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 花随人愿 at 2019-12-04 23:38:27
用质粒做标准品，因为质粒浓度是可以精准定量的，这样你的绝对定量才有意义。

谢谢您，但是最近看到文献中，有直接从标准菌株中提取基因组Dna,定量后倍比稀释作为标准品的。不知道该方法有什么弊端么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-12-08 21:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

E1nstein

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:11:59
可以直接用pcr产物，跑电泳切胶回收目的条带，然后用作标准品，可以一起交流呀

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2019-12-27 17:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhttt333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-12-29 22:12:10
用质粒DNA作标准品， 因为长度，DNA非线性等不同于样品，其qpcr efficency 不同于样品而导致结果偏差， 所以用标化的标准菌株中提取基因组dna 作标准品。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2019-12-29 06:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanglianfa

金虫 (著名写手)
同学您好 ，我也是这么想的，方便留下联系方式吗
赞一下 回复此楼
7楼2020-09-03 13:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 webbzc 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭