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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 使用JQ200SK自杀质粒敲除BL21(DE3)基因组基因的问题
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songxiawu

金虫 (著名写手)

[求助] 使用JQ200SK自杀质粒敲除BL21(DE3)基因组基因的问题 已有1人参与

在进行基因敲除的实验，想采用自杀性质粒pJQ200SK来做基因敲除，宿主细胞是BL21(DE3)，请问在敲除过程中，需要先使用pKD46诱导重组酶么？还是直接把带同源序列的目的基因用pJQ200SK直接转化BL21(DE3)就行？

我看了pJQ200SK的质粒图谱，也没有pKD46上的那些重组酶基因啊。
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努力
1楼 2019-11-25 22:12:01
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595420185

新虫 (初入文坛)
楼主有BL21（DE3）的基因组吗？可否分享一下？

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4楼2020-09-17 18:07:33
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枕琴听雨笙

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-11-26 17:57:00
用自杀质粒敲除的话，直接转化，然后筛选双交换菌株就行

pKD46用于Red重组敲除系统，自杀质粒法则是RecA介导的同源重组，两者原理不同
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2楼2019-11-26 17:28:02
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
可以直接用pkd质粒和pcp20质粒进行大肠杆菌基因敲除，最经典的方法。我们经常在做

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3楼2019-11-26 19:41:50
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