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songxiawu

金虫 (著名写手)

[求助] 使用JQ200SK自杀质粒敲除BL21(DE3)基因组基因的问题 已有1人参与

在进行基因敲除的实验,想采用自杀性质粒pJQ200SK来做基因敲除,宿主细胞是BL21(DE3),请问在敲除过程中,需要先使用pKD46诱导重组酶么?还是直接把带同源序列的目的基因用pJQ200SK直接转化BL21(DE3)就行?

我看了pJQ200SK的质粒图谱,也没有pKD46上的那些重组酶基因啊。
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努力
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枕琴听雨笙

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-11-26 17:57:00
用自杀质粒敲除的话,直接转化,然后筛选双交换菌株就行

pKD46用于Red重组敲除系统,自杀质粒法则是RecA介导的同源重组,两者原理不同
2楼2019-11-26 17:28:02
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


可以直接用pkd质粒和pcp20质粒进行大肠杆菌基因敲除,最经典的方法。我们经常在做

发自小木虫Android客户端
3楼2019-11-26 19:41:50
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595420185

新虫 (初入文坛)

楼主有BL21(DE3)的基因组吗?可否分享一下?

发自小木虫IOS客户端
4楼2020-09-17 18:07:33
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