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lyn0510至尊木虫 (著名写手)
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[交流]
20金币求助片段拼接
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| 实验得到全长基因的四个片段，四个片段拼接起来就能得到全长基因，每个片段在1K左右，片段两两之间有100-300的同源区域，尝试用OVER-LAP PCR的方法拼接，但没有连上，求高人指点，如果能做出，再给金币，并深深感谢！ |
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博士延得我，科研能力直往上蹿
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wufengjian
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lyn0510(金币+20,VIP+0):感谢专业指导，呼呼 6-13 10:33
sanko211(金币+5,VIP+0):谢谢您的积极参与。 6-13 11:02
lyn0510(金币+20,VIP+0):感谢专业指导，呼呼 6-13 10:33
sanko211(金币+5,VIP+0):谢谢您的积极参与。 6-13 11:02
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不对称PCR，你要的那条链的引物浓度是另一条的5-10倍左右，即两头的两条引物浓度是中间的两条的5-10倍左右。你可以两头的两条引物设成正常浓度，中间的设成它的1/5来试试。要拼接的两条模板也要适量多加些，各加个几百纳克差不多了吧。至于退火温度你可以试试60，55 ，50，48等等几个，因为没做过你这种几百个碱基互补的，所以也不好猜，不过既然有几百个互补，应该不成问题。我曾经用50度，一次连上三个片段，共长1800左右. 做成功后希望交流一下。 [ Last edited by wufengjian on 2009-6-11 at 00:23 ] |
6楼2009-06-11 00:21:19
shamoyuji
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2楼2009-06-09 20:45:42
lyn0510
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3楼2009-06-09 20:51:18
wufengjian
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4楼2009-06-10 08:37:50
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