| 查看: 348 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lyn0510至尊木虫 (著名写手)
|
[交流]
20金币求助片段拼接
|
||
| 实验得到全长基因的四个片段，四个片段拼接起来就能得到全长基因，每个片段在1K左右，片段两两之间有100-300的同源区域，尝试用OVER-LAP PCR的方法拼接，但没有连上，求高人指点，如果能做出，再给金币，并深深感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有14人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有13人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
wufengjian
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1414.4
- 散金: 107
- 帖子: 633
- 在线: 220.4小时
- 虫号: 350248
- 注册: 2007-04-20
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lyn0510(金币+20,VIP+0):感谢专业指导，呼呼 6-13 10:33
sanko211(金币+5,VIP+0):谢谢您的积极参与。 6-13 11:02
lyn0510(金币+20,VIP+0):感谢专业指导，呼呼 6-13 10:33
sanko211(金币+5,VIP+0):谢谢您的积极参与。 6-13 11:02
|
不对称PCR，你要的那条链的引物浓度是另一条的5-10倍左右，即两头的两条引物浓度是中间的两条的5-10倍左右。你可以两头的两条引物设成正常浓度，中间的设成它的1/5来试试。要拼接的两条模板也要适量多加些，各加个几百纳克差不多了吧。至于退火温度你可以试试60，55 ，50，48等等几个，因为没做过你这种几百个碱基互补的，所以也不好猜，不过既然有几百个互补，应该不成问题。我曾经用50度，一次连上三个片段，共长1800左右. 做成功后希望交流一下。 [ Last edited by wufengjian on 2009-6-11 at 00:23 ] |
6楼2009-06-11 00:21:19
shamoyuji
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2474.6
- 散金: 706
- 帖子: 523
- 在线: 76.8小时
- 虫号: 738989
- 注册: 2009-04-03
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
2楼2009-06-09 20:45:42
lyn0510
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 18924.2
- 红花: 2
- 帖子: 1232
- 在线: 60.4小时
- 虫号: 353773
- 注册: 2007-04-23
- 性别: MM
- 专业: 分子生物学
3楼2009-06-09 20:51:18
wufengjian
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1414.4
- 散金: 107
- 帖子: 633
- 在线: 220.4小时
- 虫号: 350248
- 注册: 2007-04-20
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
4楼2009-06-10 08:37:50
30