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新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】体克隆测序老是不正确，望有知之士帮忙！

体克隆测序老是不正确，望有知之士帮忙！
本人将目的片段连入PMD19-T中，经克隆后，进行菌落PCR，鉴定为阳性，抽取质粒并电泳，带很亮（5ul)，但经测序全为载体序列，不知为啥，希望大家帮帮忙！

1楼2009-06-08 00:28:35

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公

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薰衣草儿(金币+2,VIP+0):欢迎讨论~ 9-17 20:17

这个问题是比较容易出现的，一般来说pcr鉴定阳性的菌液就是连接产物成功转入的菌株。但是因为pcr的比较敏感，稍有污染都有可能会造成假阳性。酶切是比pcr更加精确的检验手段。你可以试试双酶切你提取的质粒看看，如果可以切开的话再送去测序应该就可以避免上述情况的发生了。

铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.

2楼2009-09-17 20:14:37

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