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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助
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tt1232028

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助

我提质粒用的是超纯水（ph在6.0左右）溶解的，后又加上RNA酶处理，-20度保存。在做实验的时候，取了10微升DNA +30微升的PBS缓冲溶液（ph在7.4）+10微升的EDTA，DNA的浓度在100ng每微升，30分钟之后电泳，8微升的进样量，紫外下检测，没有任何条带。请问哪位大侠知道这是怎么回事，原因是什么？急！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！
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1楼 2009-06-07 22:25:54
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tt1232028

铁虫 (小有名气)
我先自己顶一下
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2楼2009-06-07 22:28:19
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ilaveu

木虫 (著名写手)
DNA浓度在100ng/ul的话，只要1ul检测就应该很亮了
我们用的marker每条带才大约50ng/ul

你检测8ul都没有带
那应该是质粒没有提出来
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3楼2009-06-07 22:54:26
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frank7709

新虫 (正式写手)
肯定是没提出来！怎么提的？试剂盒吗？
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4楼2009-06-07 23:21:49
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
★
tt1232028(金币+1,VIP+0): 7-1 14:21
提完应该先测下浓度啊，再电泳。省点事
俺说1ul就很亮的
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第三军团
5楼2009-06-07 23:54:12
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lifeip

至尊木虫 (知名作家)
重提一次，或换试剂提，不嫌麻烦，自己配的质粒抽提试剂也蛮好的。
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6楼2009-06-08 00:04:57
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biogefart

木虫 (著名写手)

过程不具体

试剂盒还是自己提？
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闹太套
7楼2009-06-08 00:14:20
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baisuilan

金虫 (正式写手)
质粒浓度太低了呗。
     原因呢，可能是提的时候就没提好。纯水溶的话，-20度反复冻融也是会降解的。
PS:跑电泳时加marker没有？没marker,没准是你电泳出问题了呢。跑反了，没EB,跑漏/过了，都有可能哦
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8楼2009-06-08 00:43:39
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tt1232028

铁虫 (小有名气)
我用碱式提取法提取质粒。我在提完质粒后，马上电泳验证，是有条带的并且非常清晰，我同时也加上了marker。质粒的分子量大约在2000左右。 可是我做实验之后再跑胶却没有条带。连对照试验也没有条带，对照试验是只有DNA+PBSbuffer
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9楼2009-06-08 19:56:12
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jqq1985

银虫 (正式写手)
你的电泳上样溶液中怎么没有甘油或者蔗糖，溶液比重太小，你的样品都没办法沉到孔里面，怎么可能跑出来啊？！
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10楼2009-06-09 12:58:51
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