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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » DNS试剂测定α-淀粉酶抑制剂活性
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YJX009863

新虫 (正式写手)

[求助] DNS试剂测定α-淀粉酶抑制剂活性 已有1人参与

大家好，本人想测定某种物质对α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法测定产物糖的方法。
我是自己提取天然产物，然后买淀粉酶，测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。

根据文献的步骤：精确吸取 0. 25mL的样品 和 0. 25 mL 2mg/mL的α-淀粉酶溶液，充分混匀，在 37℃水浴中反应10 min，然后加入0.5mL 2%可溶性淀粉液，在 37 ℃水浴中准确反应 5 min。再加入 0.5mL DNS 显色剂，在沸水浴中反应 6 min，之后立即用流动自来水冷却 (终止反应)，用PBS稀释10倍在 540 nm 波长下测定吸收度，记为 OD。
样品、2%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液配置:精确称取 6.3 g DNS和 262 m L 2 mol.L-1的氢氧化钠溶液，加入含有
182 g 酒石酸钾钠的 500 m L 温度为 50℃左右的热水溶液中，再加入结晶苯酚 5 g，亚硫酸钠 5 g，充分溶解，冷却至常温后加水定容到 1 L，贮存于棕色瓶中，即成 DNS 溶液，室温下放置 7 d 后使用。

但是根据这个步骤做出来，样品组（样品+α-淀粉酶溶液），空白对照组（用pbs代替样品，其他同上），煮沸6分钟后，红棕色颜色很深，PBS稀释后，样品组OD值与空白组OD值几乎差不多，有几次做还会比空白组高。还不知道是什么原因？

求大神帮忙，我是试了好多还不出满意结果，感觉奔溃了！谢谢
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1楼 2019-10-31 18:49:24
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chaosl911

铜虫 (职业作家)
我有个protocal你要不要试试？

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2楼2019-10-31 20:54:21
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YJX009863

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chaosl911 at 2019-10-31 20:54:21
我有个protocal你要不要试试？

可以啊，试一试。谢谢啦。
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3楼2019-10-31 20:59:05
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YJX009863

新虫 (正式写手)
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4楼2019-10-31 21:36:09
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chaosl911

铜虫 (职业作家)
内容已删除
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5楼2019-11-01 00:50:03
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viola_lf

新虫 (小有名气)
请问你的DNS在哪买的呢

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6楼2019-12-26 17:55:55
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上山拔carrot

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chaosl911 at 2019-10-31 20:54:21
我有个protocal你要不要试试？

请问可以发给我试一下吗？我的QQ是747085912，非常感谢

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7楼2020-06-11 10:50:47
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15879653472

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了吗，我也遇到了相同的问题
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8楼2020-10-13 13:17:41
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洋洋9702

新虫 (小有名气)
楼主可以分享一下吗？最后是怎么做的呢

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9楼2020-12-10 19:31:59
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海韵楠馨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chaosl911 at 2019-10-31 20:54:21
我有个protocal你要不要试试？

你好，能否发我一下呢，我也遇到了相同的问题，谢谢：QQ：577360319
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10楼2021-04-06 20:11:25
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