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YJX009863新虫 (正式写手)
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[求助]
DNS试剂测定α-淀粉酶抑制剂活性 已有1人参与
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大家好，本人想测定某种物质对α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法测定产物糖的方法。 我是自己提取天然产物，然后买淀粉酶，测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。 根据文献的步骤：精确吸取 0. 25mL的样品 和 0. 25 mL 2mg/mL的α-淀粉酶溶液，充分混匀，在 37℃水浴中反应10 min，然后加入0.5mL 2%可溶性淀粉液，在 37 ℃水浴中准确反应 5 min。再加入 0.5mL DNS 显色剂，在沸水浴中反应 6 min，之后立即用流动自来水冷却 (终止反应)，用PBS稀释10倍在 540 nm 波长下测定吸收度，记为 OD。 样品、2%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液配置:精确称取 6.3 g DNS和 262 m L 2 mol.L-1的氢氧化钠溶液，加入含有 182 g 酒石酸钾钠的 500 m L 温度为 50℃左右的热水溶液中，再加入结晶苯酚 5 g，亚硫酸钠 5 g，充分溶解，冷却至常温后加水定容到 1 L，贮存于棕色瓶中，即成 DNS 溶液，室温下放置 7 d 后使用。 但是根据这个步骤做出来，样品组（样品+α-淀粉酶溶液），空白对照组（用pbs代替样品，其他同上），煮沸6分钟后，红棕色颜色很深，PBS稀释后，样品组OD值与空白组OD值几乎差不多，有几次做还会比空白组高。还不知道是什么原因？ 求大神帮忙，我是试了好多还不出满意结果，感觉奔溃了！谢谢 |
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