| 查看: 1014 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
江湖救急 已有2人参与
|
|||
|
诶，惭愧。这个PCR折磨了我一个多月了。刚开始部分能p出来，几个挑单克隆测序不对，测序出来了3个，后面再做pcr怎么p都不出来了，用什么酶都试了一遍，退火条件也试过了，都跑不出来。用基因组DNA也不行，跑出来几个，纯化后连接转化挑不出阳性。PCR卡就算了，好几个还都卡在阳性挑不出来，好郁闷啊，后面觉得是引物可能设的不好，所以重设了引物，但是也就提高了退火，降低了上下游的差异在差中选优，还是没有扩增出来。想问问有没有有经验的，想请教一下，是模板的问题吗？RNA打算重新提一下。阳性挑不出来又该怎么调整呢，用的是重组连接酶，和这个有关系吗？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有57人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-10-31 22:48:05
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-10-31 22:48:05
|
首先 你这是提什么的rna rna跑胶情况图有吗 引物是根据什么来设计的 推荐pcr温度多少 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-10-31 00:29:30
2楼2019-10-30 20:53:05
3楼2019-10-30 23:05:33
|
提的水稻的RNA有两条带，第三条带看不到。是不是不太好，浓度在1300ng左右，引物是按照infusion的要求设的除了酶切位点有15个碱基的模板匹配，剩余分别基因的cds两端，推荐的退火在60℃左右 发自小木虫Android客户端 |
5楼2019-10-31 11:47:23
5