| 查看: 1050 | 回复: 1 | |||
ap372767129铁虫 (正式写手)
|
[求助]
重组蛋白表达后没有酶活力 已有1人参与
|
|
各位大神： 我在pET-20b（+）构建的一段多糖水解酶基因，但是在25℃条件下分泌表达后，用镍柱纯化，经蛋白电泳验证能证明发酵液和周质空间中的酶蛋白已表达，由于上样是上清液，能排除是包涵体特征，但是纯化的酶没有酶活力，电泳图如下（最右侧那条粗条带是发酵液中的酶经镍柱纯化后的结果，细胞破壁纯化也有一粗条带）。 我目前有几个疑问：文献中报的这个酶表达是在pET15b中，该载体没有信号肽，是在20℃条件下的胞内诱导表达。而我的载体是pET20b（+）是有信号肽的，酶蛋白会被分泌至周质空间也有部分渗漏至发酵液中，不过我的发酵温度是25℃。我想问是因为发酵温度导致的酶蛋白折叠不正确导致没有酶活力还是该酶本应该在胞内表达才有活力（该酶本身是胞内酶，来源没有信号肽）。之前不表达的问答题刚刚解决又遇到没有活力的问题，请各位老师同学指点迷津。 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有15人回复
-
科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题
已经有14人回复
-
要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够
已经有17人回复
-
基金系统什么内容也没有
已经有10人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有5人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
2楼2019-11-06 09:31:04
30