| 查看: 442 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
请问RT-PCR中一个步骤的作用
|
|||
|
请问一下protocol中，第4步在室温放置2min和第5步25℃孵育10min的目的是什么？ Reverse Transcription is carried out with the SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR. The following procedure is based on Invitrogen’s protocol. 1. Prepare the following RNA/primer mixture in each tube: Total RNA 5 mg random hexamers (50 ng/ml) 3 ml 10 mM dNTP mix 1 ml DEPC H2O to 10 ml 2. Incubate the samples at 65°C for 5 min and then on ice for at least 1 min. 3. Prepare reaction master mixture. For each reaction: 10x RT buffer 2 ml 25 mM MgCl2 4 ml 0.1 M DTT 2 ml RNAaseOUT 1 ml 4. Add the reaction mixture to the RNA/primer mixture, mix briefly, and then place at room temperature for 2 min. 5. Add 1 ml (50 units) of SuperScript II RT to each tube, mix and incubate at 25°C for 10 min. 6. Incubate the tubes at 42°C for 50 min, heat inactivate at 70°C for 15 min, and then chill on ice. 7. Add 1 ml RNase H and incubate at 37°C for 20 min. 8. Store the 1st strand cDNA at -20°C until use for real-time PCR. [ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:14 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有4人回复
-
基金申报
已经有5人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有7人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有17人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有8人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有5人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2009-06-06 23:43:23
3楼2009-06-06 23:57:41
whllzm
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 540.9
- 散金: 10
- 帖子: 117
- 在线: 6.3小时
- 虫号: 768590
- 注册: 2009-05-12
- 性别: GG
- 专业: 生物医学材料
4楼2009-06-07 00:14:03
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
5楼2009-06-07 00:20:46
6楼2009-06-07 00:31:00