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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 红色糖多孢工具载体pSet152与pkc1139
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
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红色糖多孢工具载体pSet152与pkc1139
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楼主在利用这两个载体采用接合转移的方法做基因过表达和敲除的时候发现每次做完接合转移菌总是长成一片，还都长在边缘上，而平板中心没有菌，已经做了大概3个月了，基本没拿到突变体，因此有些怀疑这两个载体是不是可以用来做接合转移，大肠杆菌的话用的是ET12567，虽然有看到该菌株配套使用的载体是152和1139，但是不知道是否需要辅助质粒才能发生接合转移，有了解的虫友吗？求帮助

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1楼 2019-10-24 22:34:17
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biosci

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myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，为分子生物板块发展助力。 2019-10-25 23:03:06
你的质粒和菌可能有问题

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38楼2019-10-25 10:33:46
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by biosci at 2019-10-25 10:33:46
你的质粒和菌可能有问题

et12567和这两个载体都是在生物风上购买的，有没有可能是接合转移和同源交换的概率太低了导致的呢

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39楼2019-10-26 10:59:48
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
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早有人反映此公司et12568菌株，转化有问题

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40楼2019-10-26 11:45:09
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
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师兄我最近也在用ET12567中携带pjtu1278接合转移变铅青链霉菌，也是在16-20小时涂布完抗生素过了两三天后也长成一片一片的针尖状的白色菌落，请问你现在解决了吗

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41楼2019-11-11 18:39:23
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
引用回帖:
41楼: Originally posted by 一点寒芒先到 at 2019-11-11 18:39:23
师兄我最近也在用ET12567中携带pjtu1278接合转移变铅青链霉菌，也是在16-20小时涂布完抗生素过了两三天后也长成一片一片的针尖状的白色菌落，请问你现在解决了吗

不大清楚你这个pjtu1278质粒跟1139质粒差距多大呢，糊板没有关系的，可以稀释后再涂抗性板

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42楼2019-11-11 21:28:52
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
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42楼: Originally posted by 落日余晖34 at 2019-11-11 21:28:52
不大清楚你这个pjtu1278质粒跟1139质粒差距多大呢，糊板没有关系的，可以稀释后再涂抗性板
...

我感觉长出来的都不是单菌落，好像是抗性压不住，孢子都长出来的

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43楼2019-11-12 07:55:25
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
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那师兄你那长成一片的去挑菌稀释划线了吗，有阳性接合子吗

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44楼2019-11-12 07:59:22
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
引用回帖:
44楼: Originally posted by 一点寒芒先到 at 2019-11-12 07:59:22
那师兄你那长成一片的去挑菌稀释划线了吗，有阳性接合子吗

我是直接用接种环把平板上长一片的菌刮下来稀释以后涂抗性板，再放37度进行整合培养的。

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45楼2019-11-25 19:41:06
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
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45楼: Originally posted by 落日余晖34 at 2019-11-25 19:41:06
我是直接用接种环把平板上长一片的菌刮下来稀释以后涂抗性板，再放37度进行整合培养的。
...

对啊我也是后来在培养基里长得菌落我培养后破碎去pcr验证，有我的目的条带，但是我怀疑是否是有大肠杆菌的残留菌落导致的假阳性

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46楼2019-11-25 23:51:27
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落日余晖34

木虫 (正式写手)
引用回帖:
46楼: Originally posted by 一点寒芒先到 at 2019-11-25 23:51:27
对啊我也是后来在培养基里长得菌落我培养后破碎去pcr验证，有我的目的条带，但是我怀疑是否是有大肠杆菌的残留菌落导致的假阳性
...

怀疑有大肠的话可以先做个划线分离再进一步验证

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47楼2019-11-26 12:30:39
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周东浩129

新虫 (正式写手)
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楼主你的质粒转化进et12567多久进行的接合转移

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48楼2022-01-11 12:59:45
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hdchina20102楼
2019-10-24 22:35   回复  
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