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lren_87铁杆木虫 (正式写手)
傻子乐
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[求助]
蛋白提取SDS-PAGE，条带总是很弱已有1人参与
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最近一直跑sds-page，maker相对很清晰，但是蛋白条带很弱，不知道什么原因，结果见图，我补充下具体情况。 计划用磁珠法回收his标记的蛋白，所以缓冲液用的试剂盒推荐的缓冲液。 超声破碎提取的，破碎的比例是0.1g菌体：1mL缓冲液，在缓冲液的基础上加了少量巯基乙醇和曲拉通。 破碎效果挺好，浑浊变澄清，破碎后12000rpm离心10min，随后取上清加入1μL的DNase处理30min。 跑胶标准流程，12.5%，100v先跑，随后80v稳定到结束。 奈何一直都是条带很弱，求助前辈们指条路。  微信图片_20191023235914.jpg |
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