[求助] 蛋白提取SDS-PAGE，条带总是很弱已有1人参与

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大浪淘沙

1楼2019-10-24 00:04:05

lren_87

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2楼: Originally posted by xinxinjin at 2019-10-24 00:22:04
蛋白含量低呀

我也知道鸭，求分析原因和解决办法。

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大浪淘沙

3楼2019-10-24 06:52:39

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4楼: Originally posted by 13297913532 at 2019-10-25 22:58:52
有的地方不清楚哈，加DNase这个是，还有小试表达蛋白的条带亮吗？

哪里需要补充信息？加DNase主要是消化掉核酸，否则泳道抛出来都有阴影（核酸的），没有小试，实际是直接用大肠杆菌跑都没跑出漂亮的带，也就是说，压根没破碎好

大浪淘沙

5楼2019-10-26 16:10:59

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6楼: Originally posted by fairy2015 at 2019-10-28 21:29:45
淡的话一般就是蛋白含量低，可能是表达低，也可以是你破碎的问题。

我想，非目标条带都弱，应该是浓度低，但是不知道什么原因

大浪淘沙

9楼2019-10-29 21:26:32

lren_87

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7楼: Originally posted by LuckilyH at 2019-10-28 21:58:45
可能上样量不够，要不就是表达量不高

我想应该是浓度问题，我也会试着加大上样量，但是表达量不高应该是目标条带不亮，但是现在是整体都不亮。

大浪淘沙

10楼2019-10-29 21:29:41

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8楼: Originally posted by yubeihong at 2019-10-28 22:35:11
杂带都不高，细胞表达问题

我觉得，应该是提取效率问题，但是不知道怎么改善。

大浪淘沙

11楼2019-10-29 21:30:16

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13楼: Originally posted by 猴普夫尔 at 2019-11-01 07:52:09
还有，你超声破碎过程中有没有加蛋白酶抑制剂？并且，超声的时候样品还得保持低温。否则，蛋白质会降解。超声之前有没有测量菌液的OD600？0.1g菌液比1 ml缓冲液并不能说明菌液浓度。如果是你加菌都条带很弱，应该考 ...

破碎的时候加了PMSF的，也是低温破碎的，降解应该不会太严重。纯的大肠杆菌破碎后跑胶条带都很弱，所考虑是提取后浓度过低，现在想办法提高提取后浓度。

大浪淘沙

14楼2019-11-03 16:44:30