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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » ！！！求助大佬~检测基因敲入的基因组PCR（genome PCR
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MCzyk

新虫 (初入文坛)

[交流] ！！！求助大佬~检测基因敲入的基因组PCR（genome PCR

引物设计在敲入位点同源臂的上、下游，之前流式检测出的敲入成功率大概是10%，我是进行分选富集之后提基因组检测的，如果敲入成功应扩增出约4600bp的片段，如果没敲入成功应扩增出约1800bp的片段，由于敲入率低，因此两个长度的条带理论上都应该P出来。但实际我只P出了1800bp的片段，4600bp的片段偶尔能隐约看到但没有说服力，这可能是PCR产物长度差异过大加上敲入率低导致的。所以想求教各位大佬，这种情况该怎么优化PCR条件才能把长片段P出来？？？先谢过大家了！！！

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1楼 2019-10-21 19:32:43
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woshishui916

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果有带，可以做个二次扩增，然后测序验证序列。都正确刘应该是成功了

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2楼2019-10-21 21:16:51
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