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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 菌种资源 » 大肠杆菌平板计数，涂板不长菌
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sy0621

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌平板计数，涂板不长菌 已有2人参与

目前在做大肠杆菌平板计数实验，原菌液测Abs=0.8，可是稀释一系列梯度后，将溶液混匀取100uL涂板，37℃孵育后不见长菌，请问是什么原因呢？（用灭菌的0.9%氯化钠稀释）
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1楼 2019-10-16 12:01:48
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金刚太郎

新虫 (小有名气)
平板和摇瓶培养基成分是否一致？稀释液是不是不合适？（我都是用用磷酸缓冲液稀释的，效果很好）

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2楼2019-10-16 12:52:58
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sy0621

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 金刚太郎 at 2019-10-16 12:52:58
平板和摇瓶培养基成分是否一致？稀释液是不是不合适？（我都是用用磷酸缓冲液稀释的，效果很好）

一样的，你用的PBS吗？pH=7.4吗？用水可以吗？
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3楼2019-10-16 13:43:25
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
是不是稀释度太高了？一般用LB培养基就培养大肠杆菌，你用的什么培养基？大肠杆菌是营养缺陷型还是野生型？

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4楼2019-10-16 13:55:35
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sy0621

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2019-10-16 13:55:35
是不是稀释度太高了？一般用LB培养基就培养大肠杆菌，你用的什么培养基？大肠杆菌是营养缺陷型还是野生型？

蛋白琼脂膏和肉汤，稀释度很低了，原菌液也没长菌，营养缺陷型，可以用灭菌水稀释吗？
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5楼2019-10-16 13:59:58
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sy0621

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2019-10-16 13:55:35
是不是稀释度太高了？一般用LB培养基就培养大肠杆菌，你用的什么培养基？大肠杆菌是营养缺陷型还是野生型？

蛋白琼脂膏和肉汤，稀释度很低了，原菌液也没长菌，营养缺陷型，可以用灭菌水稀释吗？
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6楼2019-10-16 14:00:11
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
平时也用0.9%氯化钠溶液稀释，没有什么问题，一考虑是不是选择的稀释倍数不合适，建议先从-1到-10（或其它）试试;二考虑是不是培养时间上不够，平时培养24+-1hr，可以增加到48hr试下。
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希望大家多多交流。
7楼2019-10-16 14:03:11
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sy0621

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2019-10-16 14:03:11
平时也用0.9%氯化钠溶液稀释，没有什么问题，一考虑是不是选择的稀释倍数不合适，建议先从-1到-10（或其它）试试;二考虑是不是培养时间上不够，平时培养24+-1hr，可以增加到48hr试下。

目前试了10-1到10-8都没长菌，孵育2天也没有，稀释液换成灭菌水应该可以不会让细菌死掉吧？
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8楼2019-10-16 14:05:33
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
引用回帖:
8楼: Originally posted by sy0621 at 2019-10-16 14:05:33
目前试了10-1到10-8都没长菌，孵育2天也没有，稀释液换成灭菌水应该可以不会让细菌死掉吧？...

一般是不会的，你用原液再试试。
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希望大家多多交流。
9楼2019-10-16 14:09:06
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
引用回帖:
8楼: Originally posted by sy0621 at 2019-10-16 14:05:33
目前试了10-1到10-8都没长菌，孵育2天也没有，稀释液换成灭菌水应该可以不会让细菌死掉吧？...

如果使用原液也没有生长的话，考虑下你的培养液中是不是菌体还是培养基中沉淀物。
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希望大家多多交流。
10楼2019-10-16 14:10:19
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