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yuzhongbaihe新虫 (正式写手)
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[交流]
蛋白考染
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蛋白考染并脱色后，只发现maker的条带，所有的样品都没有跑出条带来(整个胶什么条带都没有)，连对照都没有跑出条带来，我这些样品是半个月前取得样，然后离心去上清后冻在－20℃冰箱中，先用ddH2O重悬沉淀，再加5?loading buffer混匀后，在沸水中煮样10分钟后，再离心2分钟，取上清进行SDS-PAGE分析，下层胶是用的10%，先80v跑，后200v跑，我的蛋白是116kDa，请大神给分析下，到底是哪里出来问题，怎么会一条带都跑不出来呢 发自小木虫Android客户端 |
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yuzhongbaihe(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-10-17 11:03:07
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我有几个建议，仅供参考：1、蛋白marker是预混装还是现配的？估计是买的现成的，图方便；如果是现配marker,那说明你的样品有问题。2、market能跑出来，说明胶提议没有问题，就要考虑样品和操作过程，有没有可能是蛋白浓度太大，在上样口集中在一起了？我之前就遇到过这个问题，想让条带更大一些，浓度给的很高，结果全塞住了。3、10min会不会有点长？我一般都是3～5min,并且还有点体会，越是大分子量蛋白沸水浴时间越久存留就越少，建议时间缩短点儿。4、还有这个沸水后离心取上清不是很建议，因为这个时候蛋白已经和上样缓冲液混合煮沸，被高温和SDS处理变性了，离心容易沉淀；如果有比较大的杂质的话，取样前离心取上清，再和上样缓冲液混合煮沸，吸打混匀后再上样。 发自小木虫Android客户端 |
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yuzhongbaihe2楼2019-10-16 00:00:17
yuzhongbaihe
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