| 查看: 1010 | 回复: 2 | |||
yuzhongbaihe新虫 (正式写手)
|
[交流]
蛋白考染
|
|
蛋白考染并脱色后，只发现maker的条带，所有的样品都没有跑出条带来(整个胶什么条带都没有)，连对照都没有跑出条带来，我这些样品是半个月前取得样，然后离心去上清后冻在－20℃冰箱中，先用ddH2O重悬沉淀，再加5?loading buffer混匀后，在沸水中煮样10分钟后，再离心2分钟，取上清进行SDS-PAGE分析，下层胶是用的10%，先80v跑，后200v跑，我的蛋白是116kDa，请大神给分析下，到底是哪里出来问题，怎么会一条带都跑不出来呢 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有65人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yuzhongbaihe(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-10-17 11:03:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yuzhongbaihe(myprayer代发): 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-10-17 11:03:07
|
我有几个建议，仅供参考：1、蛋白marker是预混装还是现配的？估计是买的现成的，图方便；如果是现配marker,那说明你的样品有问题。2、market能跑出来，说明胶提议没有问题，就要考虑样品和操作过程，有没有可能是蛋白浓度太大，在上样口集中在一起了？我之前就遇到过这个问题，想让条带更大一些，浓度给的很高，结果全塞住了。3、10min会不会有点长？我一般都是3～5min,并且还有点体会，越是大分子量蛋白沸水浴时间越久存留就越少，建议时间缩短点儿。4、还有这个沸水后离心取上清不是很建议，因为这个时候蛋白已经和上样缓冲液混合煮沸，被高温和SDS处理变性了，离心容易沉淀；如果有比较大的杂质的话，取样前离心取上清，再和上样缓冲液混合煮沸，吸打混匀后再上样。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
yuzhongbaihe2楼2019-10-16 00:00:17
yuzhongbaihe
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1763.3
- 散金: 201
- 红花: 1
- 帖子: 580
- 在线: 13.2小时
- 虫号: 14500165
- 注册: 2019-03-06
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2019-10-16 00:22:18
15